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1、海洋科学集刊,第集罗氏斑,《年月的海藻中类胡萝卜素的提取及含量测定严小军范晓娄清香刘晓妹中国科学院海洋研究所崔玉军吴真真陆茂荪青岛大学、许多研究已经表明,类胡萝卜素是分布最广泛、最重要的一类光辅助合成色素类胡萝卜素具有多种生物学功能作为化学保护剂可抵抗由植物自身叶绿素的光敏氧化作用引起的有害作用,给人体补充俘一胡萝卜素可有效降低心血管疾病和癌症的发生概率,高摄人富含类胡萝卜素的饮食和降低白内障发生的危险之间有重要联系,。,,、海藻中含有丰富的类胡萝卜素从结构类型说通常可以分为三类胡萝卜素。,、甲叶黄素和类胡萝
2、卜素酸海藻中还含有多种特有的类胡萝卜素如褐藻黄素藻黄素、硅藻黄素等。直到目前为止,海藻中类胡萝卜素的组成与生理学功能尚没有明确的,因而对结论我国丰富的海藻资源中的类胡萝卜素进行较为系统和全面的化学及生物活。性研究已成为摆在我们面前的一个重要课题本研究选取我国青岛海滨三类大型经济海藻红、绿、褐藻中资源量丰富的代表性种类作为实验材料,较系统地测定了其中类胡萝—卜素的含量,并运用经典的柱层析法对各类胡萝卜素组分进行了分离,通过薄层分析和可见光谱扫描对各分离组分进行了定性、定量分析材料与方法海藻的采集和前期处理实验用
3、的新鲜海藻系青岛海滨大量生长的代表性种类。采集到的样品经鉴定种、属后,用干净的海水洗涤干净,仔细除去海藻表面的附生物及杂质,用吸水纸将海藻表面的水分吸干,进行冷冻干燥,制成干品后待用冷冻干燥机为匀型冷冻干燥机,北京。,、四环科学仪器厂生产实验海藻共有种其种类采集时间和地点见表、样品的提取纯化和含测定从天然物质中分离类胡萝卜素的方法主要由生物材料的性质、溶剂提取的难易性,中国科学院海洋研究所调查研究报告第国家“九五”攻关资助项目,一一以号」。收稿臼期义刃年月日严小军等海藻中类胡萝卜素的提取及含量测定以及类胡萝卜
4、素的性质和相对重量来决定一,。通过对、,《侧和一加等人的提取和纯化方法进行比较和综孙记。合具体的实验操作方法如下取冷冻干燥后的藻样研磨成粉末研磨过程中加人,,,碳酸钙防止升温时色素被氧化破坏加人的丙酮密封遮光置于冰箱中浸泡过。,,。夜将浸泡后的藻渣用丙酮反复抽提每浸泡抽提一次直至藻渣无色将抽提液,,中的丙酮用旋转蒸发器低温蒸干仅留少许水相再用重蒸后的乙醚萃取水相中的色,素并溶解出贴壁物所得到的乙醚萃取液中加人拍体积的印的甲醇溶,于、,,液暗处静置一进行皂化绿红藻可直接皂化皂化后在溶液中加入,。的溶液使溶剂分层
5、上层醚相中含有类胡萝卜素下层水相中为皂化后的叶绿素由于褐藻中含有较多不稳定的类胡萝卜素,要预处理后才可皂化。褐藻的预处理方法为在所得到的乙醚萃取液中加人的甲醇萃取、分层,上层醚相中含有叶绿素和类胡萝卜素稳定的类胡萝卜素,可直接用于皂化,方法同前下层醇相中含有叶黄,可,素类不稳定的类胡萝卜素通过加人乙醚和水来恢复再与皂化后所得的乙醚提。,,取液合并将皂化后所得到的乙醚相蒸干用石油醚俐一印℃定容采用分,。光光度法测定类胡萝卜素的总含量海藻中各种类胡萝卜素组分的柱层析分离,,将提取出来的样品浓缩至形成高浓度的溶液使
6、样品均匀地吸附于硅胶柱,以,。二的硅胶一刃目青岛海洋化工厂洗脱液为正己烷和乙酸乙醋的,,,“,,以便洗梯度溶液分别为逐渐增加洗脱液中极性溶剂的比例下吸附于柱上的极性较大的色素组分,对于个别较难洗下的组分可用纯乙酸乙醋或含。,丙酮的乙酸乙醋溶液洗脱由于类胡萝卜素本身具有比较明显的颜色故按不同颜,,色的色层来进行分离组分的收集收集到的组分用旋转蒸发器蒸干然后用丙酮溶解并。,,定容至一定体积将定容后的组分用遮光纸包住放在冰箱中保存待薄层分析和光谱。,,测定用层析板为硅胶板尺寸为青岛海洋化工厂展层剂为正。己烷、表实验
7、海藻采集的时间地点海藻名称采集时间采集地点褐藻鼠尾藻撇唱山,卯青岛太平角海黍佬姆洲叨刀倪叨卯青岛太平角子撇妙裙带菜。又凌王正男青岛太平角声夕讼尸产月州哭市售海带加哪红藻条斑紫菜、甲子,,,此。‘刀〕青岛太平角石花菜晓奴自价望刹〕青岛太平角鸭毛藻与”笋汉成汉泣必如龙“,口由理青岛太平角护海洋科学集刊续表海藻名称采集时间采集地点,刀硬川别孟少饭正望洲青岛太平角金膜藻以哪剖绿藻。。了了志乙里望〕缘管浒苔加。‘二青岛太平角刺松藻‘二到人‘户理君走塑为,青岛太平角才伪人刀习衍印巡洲〕海洋所提供小球藻、砚泊泊组“雨生红球
8、藻月血侧山川瓜华涎海洋所提供为淡水种海藻中各种类胡萝卜素组分的光谱特性及定性定皿分析、、一一二标准类胡萝卜素试剂为胡萝卜素公司俘胡萝卜素公司少五、、。一米黄素快公司日隐藻黄素诀公司角黄素公司褐藻黄素按。照从羊栖菜中分离纯化的方法制备一型分各类胡萝卜素组分用光光度计美国公司进行可见波长扫描,确定特征吸收峰,并测定最大吸收波长处的吸光度。根据各类胡萝卜素标准物的特征吸收峰,科,知蒯,,薄层分析,以及从吸
