毕业论文--灰霉菌糖异生限速酶PEPCK基因的敲除突变体的回补

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1、中文摘要灰霉菌(Botrytiscinerea)通常又称作灰葡萄孢菌，属于子囊菌门（Ascomycota)真菌，是植物灰霉病的病原菌，可侵染500多种植物。在果蔬生产中，灰霉病已成为主要病害，每年造成巨大的经济损失。PEPCK(Phosphoenolpyruvatecarboxykinase)是磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶，催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸，是糖异生途径的第二个限速酶。为了进一步阐释灰霉菌PEPCK基因（BcPCK）在灰霉病菌生长发育和致病过程的调控作用，本研究通过构建BcPCK基因缺失突变体的回补载体，利用农杆菌介导

2、的同源重组方法，得到BcPCK基因缺失突变体的回补转化子（DBcPck-C），并在此基础上验证BcPCK基因对致病性的作用。通过表性分析发现，与敲除突变体相比，回补菌株DBcPck-C的致病力有所恢复，并且基本不影响菌丝生长。本研究结果验证，灰霉菌DBcPCK基因在灰霉菌致病过程中发挥重要的调控作用。关键词：灰霉菌；磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）;基因敲除；生长发育；致病性ⅠAbstractPlantgraymoldfungusBotrytiscinerea,belongstoAscomycotafungi,caninfe

3、ctover500plantspecies.Intheproductionoffruitsandvegetables,graymoldhasbecomeamaindisease,andannuallycausesenormouseconomiclosses.Phosphoenolpyruvatecarboxykinase(PEPCK)isthesecondrate-limitingenzymeforgluconeogenesis,whichcatalyzestheformationofphosphoenolpyruvatebyo

4、xaloacetate.TofurtherillustratetheregulationofPEPCKgeneinthegrowthandpathogenesisofB.cinerea,wegeneratedacomplementaryvectorcarryingafulllengthofBcPEPCKCDSandobtainedthecomplementedstrain(ΔBcpck-C)oftheBcPEPCKgeneknockout(KO)mutant(ΔBcpck)byusingAgrobacteriumtumefaci

5、ens-mediatedhomologousrecombinationmethod.ThecomplementedstrainwasusedtoverifytheroleofBcPEPCKgeneinthepathogenvirulence.ThephenotypicanalysisresultshowedthatthepathogenicityofthecomplementedstrainΔBcpck-CwasrecoveredwhencomparedtotheBcPEPCKgeneknockoutmutant.Ourresu

6、ltsalsodemonstratedthatmycelialgrowthoftheBcPEPCKgeneKOmutantwasunaffected.OurfindingsindicatetheBcPEPCKgeneplaysanimportantroleinthepathogenesisofB.cinerea.Keywords：Botrytiscinerea，PEPCK，geneknockout,genecomplementation,pathogenicity目录前言.............................

7、...............................................................................1第1节灰霉病及其危害..................................................................1第2节灰霉菌..................................................................................1第3节糖异生与糖异生限速酶PEPCK...

8、.....................................2第4节本研究的目的与意义..........................................................3第一章材料与方法..............