2016新课标创新人教生物选修1 专题2 课题1 微生物的实验室培养

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1、一、培养基1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。2．种类按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。3．营养要素各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。二、无菌技术1．获得纯净培养物：关键是防止外来杂菌的入侵。2．无菌操作主要包括以下四个方面(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近

2、进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。3．消毒和灭菌(1)消毒①概念：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。②常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。(2)灭菌①概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。②常见的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。三、大肠杆菌的纯化培养1．制备固体培养基版权所有:中国好课堂www.zghkt.cn2．纯化大肠杆菌(1)微生物接种最常用的方法①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连

3、续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(2)微生物培养分析①如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明接种操作符合要求。②若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中被杂菌污染。③未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落，说明灭菌不彻底，实验失败。四、菌种保存临时保藏法甘油管藏法适用对象频繁使用的菌种长期保存的菌种培养基类型固体斜面培养基液体培养基温度4_℃－2

4、0_℃方法菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存缺点菌种易被污染或产生变异/版权所有:中国好课堂www.zghkt.cn[共研探究]1．下面是察氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，根据下表，回答下列问题：蔗糖NaNO3K2HPO4KClMgSO4·7H2OFeSO4琼脂水20g3g1g1g0.5g0.01g20g定容至1000mL(1)该培养基根据物理性质划分应是固体培养基，原因是该培养基中加入了凝固剂琼脂。(2)该培养基包含微生

5、物生长和繁殖所需要的4类营养物质(成分)，分别是碳源、氮源、无机盐和水。有时候还需要加入特殊的营养物质(生长因子)。(3)①蔗糖提供碳源，除此之外，提供碳源的主要有：a.无机化合物CO2、Na2CO3等；b.有机化合物糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等。②NaNO3提供氮源和无机盐。(4)碳源、氮源、生长因子在微生物体内的作用营养要素作用碳源构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养微生物的能源物质氮源合成蛋白质、核酸及含氮代谢废物生长因子酶和核酸的组成成分【总结提升】　某些微生物的代谢及特点(1)硝化细菌：自养，需NH3

6、或亚硝酸盐做氮源。(2)圆褐固氮菌：异养，培养基中不需加氮源。(3)金黄色葡萄球菌：异养，培养基中需加高浓度食盐。(4)破伤风杆菌：异养厌氧。2．无菌技术(1)目的：防止外来杂菌的入侵。版权所有:中国好课堂www.zghkt.cn(2)消毒和灭菌的比较项目消毒灭菌概念使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、操作者、一些液体等接种环、接种

7、针、玻璃器皿、培养基等(3)连线(4)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。【易错易混】(1)消毒与灭菌的最根本区别：芽孢和孢子是否存活。灭菌能杀死芽孢和孢子，因而灭菌更彻底。(2)具体选择消毒还是灭菌需要考虑：一是效果，灭菌的效果比消毒要好；二是操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。[总结升华]1．培养基的成分营养物质作用功能主要来源碳源能为微生物代谢提供碳元素构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源：C

8、O2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能为微生物的代谢提供氮元素合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子是生长必不可少的酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水是生命活动所必需的不仅是优良的溶剂而且可