流式细胞原理

《流式细胞原理》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、流式细胞原理BD生物科学牛海鹏18601916136Hyper_niu@bd.com流式细胞术的基本概念流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量BDBiosciencesImmuneFunctionBDBiosciencesImmuneFunctionBDBiosciencesImmuneFunction

2、散射光信号RightAngleLightDetectorCellComplexitySSCLaserFALSSensorIncidentForwardLightDetectorLightCellSurfaceAreaSourceFSC前向角散射光（FSC,ForwardScatter）细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC,SideScatter）细胞粒度及细胞内相对复杂性BDBiosciencesImmuneFunction外周全血细胞散射光双参数点图颗粒杂质、气泡（红细胞溶解后）对检测的影响BDBiosciencesImmu

3、neFunction流式细胞仪的检测信号荧光信号•使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析•荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量BDBiosciencesImmuneFunction荧光信号BDBiosciencesImmuneFunction数据分析数据存储:LISTMODE数据显示:直方图(Histogram)FSCSSCFL1FL2二维点图(DotPlot)Event13060638840等高线图(ContourPlot)Event210016024585密度图(Density)Event3300650160720三维图（3D

4、Plot）等BDBiosciencesImmuneFunction单参数直方图分析荧光峰的高低即在纵轴对应的高度反映了？荧光峰的高低即在纵轴对应的高度反映了具有此种荧光强度的细胞在样本中所占比例的相对多少，而非绝对数目BDBiosciencesImmuneFunction双参数散点图分析BDBiosciencesImmuneFunction数据分析等高图和密度图分析BDBiosciencesImmuneFunction数据分析三维图分析BDBiosciencesImmuneFunction流式对照的设置荧光染色对照的设置1•阴性对照合

5、适？空白对照•自发荧光，即不经荧光染色细胞内部荧光分子经光照发出的荧光。自发荧光信号为噪声信号。一般说来，细胞成分中能产生自发荧光的分子（核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强，如肿瘤细胞、粒细胞等；样本死细胞比例越高自发荧光越强实验样本•特异荧光，即抗体F(ab’)2段与细胞抗原特异结合上的荧光染料受光照发出的荧光•非特异荧光，即抗体Fc段与细胞表面的Fc受体非特异结合上的荧光染料受光照发出的荧光•自发荧光＋特异荧光＋非特异荧光同型对照（自发荧光＋非特异荧光）BDBiosciencesImmuneFunction同型对照•同型

6、对照（IsotypeControl）：与实验染色的单克隆抗体特异性无关的免疫球蛋白亚型（即Fc段相同，F(ab’)2段不同）与染色的单克隆抗体①相同种属来源②相同免疫球蛋白及亚型③相同荧光素标记④相同剂量和浓度⑤但由未免疫动物血清纯化而来用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面的Fc受体而产生的背景染色例如，标记FITC的单克隆抗体为小鼠IgG1亚类抗体，标记PE的单克隆抗体为小鼠IgG2a亚类抗体，同型对照应用相同浓度和剂量的BDBiosciences未免疫小鼠血清的纯化IgG1（γ1）和IgG2a（γ2a），并分别标记Immune

7、FunctionFITC和PE商业化荧光素的发射光谱spectraloverlapBDBiosciencesImmuneFunctionFluorescenceSpectrumViewerspectraloverlap如何解决？BDBiosciencesImmuneFunction荧光染色对照的设置2•补偿对照（双色或多色分析中，荧光素发射光谱重叠时）荧光补偿（compensation）是指在流式细胞多色分析中，纠正荧光素发射光谱重叠（spectraloverlap）的过程，即从一个被检测的荧光信号中去除任何其他的干扰荧光信号已染色样本

8、？真双阳？假双阳？BDBiosciencesImmuneFunction荧光染色对照的设置2•补偿对照（双色或多色分析中，荧光素发射光谱重叠时）荧光补偿（compensati