Bio-Rad荧光定量PCR-iQ5说明书

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1、1.iQ™5多重实时荧光定量PCR仪简介在现代分子生物学的发展过程中，核酸放大技术的出现及与之相关的检测技术的成熟起到了至关重要的作用，而实时荧光定量PCR技术可以说是两者完美的结晶。它通过加入能与DNA结合的荧光染料或在引物/探针上标记荧光基团等方法，在PCR过程中，随着产物的量不断增加，荧光信号也随之发生相关性的变化，再通过数学处理，算出原始靶DNA的含量。实时荧光定量PCR技术可以在较大的动力学范围内实现精确定量，其灵敏度也达到相当高的程度。随着这项技术的发展，其专用的实时荧光定量PCR仪也应运而生。我们伯乐公司这次推出的iQ™5多重实时荧光定量PC

2、R仪是在iCycler荧光定量PCR仪的基础上强化而成，以求性能达到最优。iQ™5多重实时荧光定量PCR仪所装配的光源（钨卤素灯）拥有更宽的光谱范围，给予用户在其选择上最大限度的灵活性。经过优化的激发/发射透镜组可以显著提高多重PCR的灵敏度，减少多重荧光之间的干扰。它的CCD检测器可以同时监测96个反应孔的荧光数据。在热循环过程中，当前完整的实验数据会被软件实时地以图解的形式表现出来。实时的数据显示可以大大提高反应孔与孔之间数据比较的可靠性，iQ™5多重实时荧光定量PCR仪则可以方便地实现数据实时显示，有利于及时反馈试验状况。以上介绍的各项特性保证了iQ

3、™5多重实时荧光定量PCR仪在使用过程中具有更强的可靠性和灵活性。iQ™5多重实时荧光定量PCR仪所配备的运行、分析软件设计得十分人性化，且功能强大。其功能模块的界面模式可使用户可以快速地完成各种操作。当用户把光标放在软件的功能键上时，其下方还会出现相应说明文字。此外，按键盘的―F1‖键还可以启动在线帮助指南。当用户设定完结果分析参数后，点一键即可得到最终分析结果。12.iQ™5使用快速指南2.1如何用iQ™5运行一次实验2.1.1综述1.创建、选择或修改一个反应程序文件（Protocolfile）2.创建、选择或修改一个反应板设置文件（PlateSetu

4、pfile）。3.点击―Run‖键。4.以选定的反应板设置文件和反应程序文件进行反应。2.1.2反应程序文件（Protocolfile）设置指南用户可以在Workshop模块中，创建一个新的反应程序文件，或是直接选择或修改一个已有的反应程序文件。2.1.2.1选择一个已有的反应程序文件1.点击―Protocol‖键，在弹出的浏览器中选定所要选择的反应程序文件的路径。22.点击所需的反应程序文件的文件名，此时该文件的具体设置在―SelectedProtocol‖窗口中显示出来。注意：iQ™5软件安装后，里面会自带一些我们设置好的反应程序文件作为示例，用户可以

5、直接调用它们。2.1.2.2创建或修改一个反应程序文件在―SelectedProtocol‖窗口点击―Edit‖键即可对当前的反应程序文件进行修改；在―SelectedProtocol‖窗口点击―CreateNew‖键即可创建一个新的反应程序文件。无论点击―Edit‖或―CreateNew‖键，软件都会自动切入―ProtocolEdit‖窗口。这个窗口下部有一显示反应内容的表格，用户可以在其中按自己的需求进行修改。1.修改保温时间和保温温度。―DwellTime‖列设置保温时间，―Setpoint‖列设置保温温度。如果用户要设置一个310秒的保温时间，那就

6、要在相应格中输入0：10或者0.10。2.选择荧光数据收集步骤―DataAcquisition‖列用于设置荧光数据收集步骤。其中―Real-Time‖选项用于荧光定量，―MeltCurve‖用于熔点曲线分析。注意：如要进行荧光PCR实验，必须保证程序中至少有一个荧光数据收集步骤。3.插入循环或步骤在表格中―Cycle‖列有数字显示的行，点击该行―Insert‖列的―+‖，即可完成循环插入，系统默认插入的循环在当前循环之后。在表格中―Step‖列有数字显示的行，点击该行―Insert‖列的―+‖，即可完成步骤插入，系统默认插入的步骤在当前步骤之后。4.删除循

7、环或步骤点击某Cycle行―Delete‖列的―×‖，即可将该循环删除。点击某Step行―Delete‖列的―×‖，即可将该步骤删除。5.文件保存点击―SaveandExitProtocolEditing‖键，在随后出现的―Saveas‖对话框中输入程序文件的名称，再点击―Save‖键即可完成保存。注意：点击―SaveandExitProtocolEditing‖键或―CancelandExitProtocolEditing‖键才能退出―ProtocolEdit‖窗口。2.1.3反应板设置文件（PlateSetupfile）设置指南1.在Workshop模

8、块中，用户可以：a.点击反应板设置文件显示区的―CreateNew