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《蛋白质组学研究中的液相色谱、 生物质谱及Mascot原理与应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、蛋白质组学研究中的液相色谱、生物质谱及Mascot原理与应用¾生物质谱原理与仪器类型¾色谱分离原理及应用¾液质联用技术应用实例¾Mascot与质谱数据分析¾生物质谱原理与仪器类型¾色谱分离原理及应用¾液质联用技术应用实例¾Mascot与质谱数据分析质谱的基本概念一、质谱(MassSpectromety)(是什么？特殊的天平：称量离子的质量。质谱学：是一门研究气相离子结构、性质及反应行为的科学。二、质谱能做什么？定性：化合物的结构定量：混合物的组成领域：化学、生物学、医学、药学、254.2100环境、物理、材料、能源等507.3三、质谱的独到之处是什么？4S特性：Sensitivity灵敏%S
2、peed快速334.3194.2Specificity特异399.7Stoichiometry化学计量0m/z100200300400500600质谱学的发展历史质谱学领域的诺贝尔奖1906年：物理奖J.I.Thomson贡献：正电荷离子束在磁场中的偏转⇒磁质谱仪的基础同位素分析1989年：物理奖W.Paul贡献：离子阱技术的发明2002年：化学奖J.B.FennVirginiaCommonwealthUniversity,USA贡献：电喷雾(ESI)电离方法生物大分子分析ElectrosprayIonizationforMassSpectrometryofLargeBiomolecules
3、,"J.B.Fenn,M.Mann,C.K.Meng,S.F.WongandC.M.Whitehouse,Science246,64(1989)KoichiTanaka(田中耕一)ShimadzuCorporation,Japan贡献：基质辅助激光解吸(MALDI)电离方法生物大分子分析RapidCommunicationsinMassSpectrometry2,151-153(1988),KoichiTanaka,HiroakiWaki,YutakaIdo,SatoshiAkita,Yoshikazu质谱仪的主要构成•离子源•质量分析器•检测器•离子光学系统•真空系统离子源ESI(Elec
4、trosprayIonization)电喷雾电离•NanoESI•特点：能与HPLC很好地在线联用•翻译后修饰分析•多电荷MALDI(matrixassistedlaserdesorptionionization)基质辅助激光解吸附电离•特点：快速、直接观察大分子(几十KD到上百KD)•糖肽分析•单电荷MALDI电离原理SampleplateLaserhn1.Sample(A)ismixedwithexcessmatrix(M)anddriedonaMALDIplate.2.Laserflashionizesmatrixmolecules.AH+3.Samplemoleculesareion
5、izedbyprotontransferfrommatrix:MH++AÆM+AH+.VariableGroundGridGrid+20kV选择合适基质SinapinicAcid蛋白质>10kDaa-Cyano-4-Hydroxy-多肽<10kDacinnamicacid（CHCA)2,5DihydroxybenzoicNeutralCarbohydrates,acidSyntheticPolymers“SuperDHB”Proteins,Glycosylatedproteins3-HydroxypicolinicOligonucleotidesacidHABAProteins,Oligos
6、accharides质量分析器•Q(quadrupole)四极杆•TRAP(IonTrap)离子阱•TOF(Time-of–flight)飞行时间•FT(FourierTransform)傅立叶变换•………四极杆•4极质荷比分析器(圆形或双曲线)•用直流或交流电压过滤m/z线性四极杆•质量过滤•改变电压–不同质量离子过滤到检测器•离子在特定轨道输送到检测器•最多使用于LC/MS•质量分辨单位•0.1u质量精确度•质量范围:50-2000•真空:低10-4,10-5torr三维四极杆离子阱EndcapElectrode•交流电压应用于环形电极来捕获离子•氦气引入到离子阱Ring1)碰撞进样时的
7、冷离子Electrode2)诱导分裂(MSn实验)EndcapElectrodeFigureadaptedfromMarch,R.E.inEncyclopediaofAnalyticalChemistry;Meyers,R.A.,Ed.;JohnWiley&SonsLtd.:Chichester,UK,2000;pp.11848-11872.飞行时间质量分析器飞行时间质量分析器离子源中的离子经加速电压获得的速
