番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立

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1、园艺学报2010，37（）：4661–668ActaHorticulturaeSinica番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立111112,*1,*黎飞，徐秋芳，臧宪朋，赖亿玉，程维舜，徐幼平，蔡新忠12（浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所，杭州310029；浙江大学分析测试中心，杭州310029）摘要：通过对IPG胶条梯度、上样方式、上样量、聚焦条件等4方面条件的优化，建立了番茄子叶总蛋白双向电泳体系，即采用TCA丙酮沉淀法提取番茄子叶总蛋白，选用24cmpH3-7NL的IPG胶条，采用水化

2、上样，上样量300μg，按聚焦程序Ⅰ或Ⅱ聚焦后进行双向电泳分离和银染染色。若采用制备胶，以获取高含量蛋白点，则将上样量提高至1.5mg，按聚焦程序Ⅲ进行聚焦后进行双向分离，并采用胶体考马斯亮蓝染色。采用该优化的体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。关键词：番茄；双向电泳；条件优化；子叶；蛋白质中图分类号：S641.2文献标识码：A文章编号：0513-353X（2010）04-0661-08EstablishmentofTwo-dimensionalElectrophoresisSyste

3、mofTomatoCotyledons111112,*LIFei，XUQiu-fang，ZANGXian-peng，LAIYi-yu，CHENGWei-shun，XUYou-ping，andCAI1,*Xin-zhong1（InstituteofBiotechnology，CollegeofAgricultureandBiotechnology，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China；2CentreofAnalysisandMeasurement，Zhej

4、iangUniversity，Hangzhou310029，China）Abstract：Atwo-dimensionalelectrophoresis（2-DE）systemforproteomicanalysisoftomatocotyledonswasestablishedbyoptimizingtheparametersincludingthepHgradientofIPGstrip，sampleapplication，sampleloadingandisoelectricfocusin

5、gconditions.Theoptimizedsystemincludethefollowingsteps：ExtractingthetotalproteinfromtomatocotyledonsbyTCA/acetoneprecipitation，separatingtheproteinswith24cmpH3-7NLIPGstrips，loadingproteinsamplesof300μgbyrehydrationmethodfollowedbyisoelectricfocusingp

6、rogramⅠorⅡ，andstainingthegelsbysilverstainingafterSDS-PAGEelectrophoresis.Whenpreparativegelwasapplied，inordertoobtainabundantproteinspots，1.5mgsamplewasloadedfollowedbytheisoelectricfocusingprogramⅢ，andstainingwithcolloidalCoomassieBrilliantBlue.Rep

7、roducibleprofileswithhighresolutionwereobtainedbythisoptimized2-DEsystemoftomatocotyledon.Keywords：tomato；two-dimensionalelectrophoresis（2-DE）；conditionoptimization；cotyledon；protein蛋白质组学分析是后基因组时代分析生物学功能的重要技术手段。建立一套重复性好和分辨率收稿日期：2009–09–22；修回日期：2010–0

8、3–23基金项目：‘973’计划项目（2009CB119000）；国家自然科学基金项目（30671352，30200179）；浙江省自然科学基金杰出青年团队项目（R307396）；教育部霍英东教育基金会高等院校青年教师基金项目（101032）﹡通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：ypxu@zju.edu.cn；xzhcai@zju.edu.cn）662园艺学报37卷高的双向电泳体系是成功开展蛋白质组学分析的基础。由于植物、动物或微生物等研究对象的蛋白质组成成分千