牦牛大肠埃希氏菌病蜂胶疫苗的研制

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1、西藏大学硕士学位论文牦牛大肠埃希氏菌病蜂胶疫苗的研制姓名：杨晓丹申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：曾群辉20090501西藏大学农牧学院硕士学位论文摘要目前牦牛大肠埃希氏菌病疫苗的研究只有牦牛大肠埃希氏菌病铝胶佐剂疫苗，但是铝胶佐剂疫苗易冻结而失效，而蜂胶佐剂疫苗由于其良好的防冻性，能有效的解决在西藏高原低温条件下疫苗的运输和贮藏问题。因此研制蜂胶疫苗可以在西藏高原条件下有效地预防牦牛大肠埃希氏菌病。本研究首先选用山东与四川两种蜂胶进行试验，两种蜂胶均按蜂胶与乙醇的比例1∶2、1∶4、1∶5、1∶6、1∶8分别进行提取；经蜂胶乙醇提取物的防冻试验结

2、果表明：蜂胶与乙醇的比例1∶4、1∶5、1∶6和1∶8所提取的蜂胶乙醇提取物，在-28～-30℃时72h未结冰；经蜂胶乙醇提取比例试验结果表明：蜂胶与乙醇的比例1∶5进行提取，为最佳蜂胶与乙醇提取比例，且山东蜂胶提取物的效果优于四川蜂胶。因此，作者选用山东蜂胶，按蜂胶与乙醇1∶5的比例提取的提取物，加入乳化剂和无离子水配制了3批蜂胶佐剂（蜂胶的含量分别为20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL）。选用西藏-9903牦牛大肠埃希氏菌菌株，进行菌液培养、纯粹检验、活菌计数、甲醛灭活及无菌检验，按照1份灭活的菌液加入1份蜂胶佐剂，充分混匀后，于4℃静置过夜后

3、为蜂胶疫苗，同此方法配制3批蜂胶疫苗，编号为200801、200802和200803（蜂胶含量分别为10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL），进行分装及成品检验。结果表明，3批牦牛大肠埃希氏菌病蜂胶疫苗：经无菌检验为阴性；经物理性状检验为：静置后上层是乳黄色液体，下层为土黄色沉淀，振荡后呈均匀混浊液；经安全性试验表明对家兔和西藏牦牛进行了初次接种和再次递增剂量的接种均是安全的；经免疫效力试验表明对家兔和西藏牦牛均有效，免疫后机体产生的抗体效价在2.70927log2～3.61236log2之间，具备免疫保护能力，并且根据家兔免疫效力抗体消长规律，免疫

4、6个月后，家兔仍然具备免疫保护能力。经防冻试验结果表明，随着蜂胶含量的增高，防冻效果越好。200801批蜂胶疫苗在-18℃易结冰，而200802批蜂胶疫苗在-18℃24h不结冰，200803批蜂胶疫苗在-18℃15d不结冰。通过对3批蜂胶疫苗的免疫效力试验和防冻试验的结果分析表明，3批疫苗的免疫效果差异不显著；并且200802批蜂胶疫苗的乙醇含量较200803批蜂胶疫苗低，并能满足在西藏高原条件下的低温运输，故为首选。200802批蜂胶疫苗与铝胶疫苗和油乳剂疫苗的比较试验结果表明，铝胶疫苗的免疫效果略低于蜂胶疫苗和油乳剂疫苗，铝胶疫苗易冻；油乳剂疫苗的免疫效

5、果略高于蜂胶疫苗和铝胶疫苗，但不易注射和难以吸收；而蜂胶疫苗的免疫效果介于铝胶疫苗和油乳剂疫苗之间，蜂胶疫苗可以防冻、易注射和易吸收，故对牦牛大肠埃希氏菌病的预防，作者首选蜂胶疫苗。所以，蜂胶疫苗的研制成功将为西藏牦牛大肠埃希氏菌病的预防提供临床依据，为疫苗在西藏低温条件下推广应用提供试验依据。关键词：牦牛大肠埃希氏菌病；蜂胶佐剂；蜂胶疫苗；安全性试验；免疫效力试验I摘要AbstractTheresearchofthevaccinesofEscherichiacoliinyakhavebeenonlyinactivatedAl(OH)3vaccineofEs

6、cherichiacoliinyakatpresent.ButinactivatedAl(OH)3vaccineiseasilyfreezingandfailure,thereisgoodfreeze-proofinpropolisvaccine,andtheproblemsthatvaccineistransportedandstoredatlowtemperatureintheTibetplateaucanberesolvedeffectually.Theresearchonpropolisvaccinecaneffectivelypreventthed

7、iseaseofEscherichiacoliinyakinTibetplateau.ThisexperimentisdonewithtwokindsofpropolisthatcomefromShandongandSichuaninthestudyatthebeginning.Twokindsofpropolisaremadeextractingrespectivelyaccordingtotheproportionsofpropolistoethanol,by1∶2,1∶4,1∶5,1∶6and1∶8.Theantifreezingexperimento

8、fethanolextractofpropoliss