反浇培养基法在微生物限度检查中的应用

《反浇培养基法在微生物限度检查中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、反浇培养基法反浇培养基法在微生物限度检查中的应用在微生物限度检查中的应用杭州泰林生物技术设备有限公司2009年5月微生物限度检查v定义v检查项目v环境要求v检查方法如何消除药品中的抑菌成分而进行微生物如何消除药品中的抑菌成分而进行微生物限度检查？限度检查？培养基稀释法培养基稀释法离心沉淀集菌法离心沉淀集菌法中和法中和法薄膜过滤法薄膜过滤法----2005版中国药典的规定为何推荐使用薄膜过滤法？为何推荐使用薄膜过滤法？1、薄膜过滤法对具有抑菌成分的供试品，利用体积差异分离，能快速、有效的去除供试液中抑菌成分的干扰。2、可将供试液中的微生物富集、截留于滤膜上，提高检出率。3、相对于另三种方法，对

2、供试品的适用范围更广泛。某些供试品组合应用上述方法，更容易通过验证薄膜过滤后菌数检查方法薄膜过滤后菌数检查方法55种方法：种方法：AA、洗脱法、洗脱法BB、浇膜法、浇膜法CC、贴膜法、贴膜法DD、液体培养基反注法、液体培养基反注法EE、、反浇培养基法反浇培养基法薄膜过滤后菌数检查方法薄膜过滤后菌数检查方法11：洗脱法：洗脱法1）过滤后取出滤膜；2）将滤膜放入装有洗脱液的无菌容器中，振荡洗脱；3）洗脱后取洗脱液用平皿法进行计数※步骤较多，操作复杂※增加了污染的风险※菌数回收率较低（过滤后，滤膜上的微生物难以洗脱下来）※ISO11731：1998采用，已被ISO11731：2004代替，洗脱法已

3、基本被淘汰薄膜过滤后菌数检查方法薄膜过滤后菌数检查方法22：浇膜法：浇膜法11）过滤后取出滤膜放入平皿内；）过滤后取出滤膜放入平皿内；22）直接向滤膜上浇注培养基；）直接向滤膜上浇注培养基；33）将平皿培养后进行计数）将平皿培养后进行计数※※步骤较多，操作复杂步骤较多，操作复杂※※增加了污染的风险增加了污染的风险※※影响需氧菌的恢复生长，导致菌数回收率低影响需氧菌的恢复生长，导致菌数回收率低※※未得到正式应用未得到正式应用薄膜过滤后菌数检查方法薄膜过滤后菌数检查方法33：贴膜法：贴膜法11）过滤后取出滤膜；）过滤后取出滤膜；22）将滤膜菌面向上平贴于含琼脂培养基的平皿内；）将滤膜菌面向上平贴

4、于含琼脂培养基的平皿内；33）将平皿倒置培养后进行计数）将平皿倒置培养后进行计数现行得到广泛应用现行得到广泛应用※步骤较多，操作复杂※增加了污染的风险※膜与培养基之间易产生气泡、贴膜不实导致滤膜滑脱薄膜过滤后菌数检查方法薄膜过滤后菌数检查方法44：液体培养基反注法：液体培养基反注法11）直接将供试液过滤，无需取出滤膜；）直接将供试液过滤，无需取出滤膜；22）向含有衬垫的培养盒内注入液体培养基，衬垫与）向含有衬垫的培养盒内注入液体培养基，衬垫与滤膜接触，将培养盒直接培养后计数。滤膜接触，将培养盒直接培养后计数。直接将滤膜固定于滤器上，无需取膜及转移，滤直接将滤膜固定于滤器上，无需取膜及转移，滤

5、器可改装成培养盒，操作简单器可改装成培养盒，操作简单※对培养基的加入量有严格要求，操作性差※菌落生长较小※当衬垫直接安装于滤器上时易吸附抑菌性物质薄膜过滤后菌数检查方法薄膜过滤后菌数检查方法55：反浇培养基法：反浇培养基法11）直接将供试液过滤，无需取出滤膜；）直接将供试液过滤，无需取出滤膜；22）直接将过滤后的滤器倒置，向滤膜上浇注固体培）直接将过滤后的滤器倒置，向滤膜上浇注固体培养基，凝固后直接改装为培养盒，培养、计数。养基，凝固后直接改装为培养盒，培养、计数。操作最为简单的一种方法操作最为简单的一种方法薄膜过滤法：滤膜的要求薄膜过滤法：滤膜的要求v1）符合药典要求孔径：中国药典：…滤膜

6、孔径应不大于0.45μm，USP：“…Usemembranefiltersofanappropriatematerialwithaporesizeof0.45μmorless.”直径：中国药典：从“…直径约为50mm。…”改为“…直径一般为50mm（若采用其它直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整）。…”USP：“Filtersabout50mmacrossarerecommended,butothersizesmaybeused.”被推荐的过滤器直径约50mm，但其它大小的可以被使用。薄膜过滤法：滤膜的要求薄膜过滤法：滤膜的要求2）材质：不同材质的滤膜对供试品中抑菌成分的吸附量、冲洗解析度、与

7、供试品的化学兼容性等特性均存在一定的差异；选用材质是否适当的滤膜，对验证/检验结果会产生显著影响。化学兼容性保证微生物的充分被截留，即保证滤膜过滤前后的完整性；中国药典：“选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。”------化学兼容性问题3)其它需要考虑的问题：微生物恢复生长性能、对供试品的过滤效率等。薄膜过滤法：滤膜的要求薄膜过滤法：滤膜的要求((种类种类))亲水性滤膜材质：亲水性滤膜