紫外可见分光光度计的使用

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1、紫外可见分光光度计主要内容1、工作原理及仪器组成2、分光光度计的使用波长扫描定量测定3、注意事项物质的颜色与吸收光的关系：当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。一、工作原理及仪器组成互补色原理植物叶子呈现绿色是因为植物中存在一种吸收蓝紫光和红光的载体——叶绿素颜色的产生完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光利用一定频率的紫外--可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。溶液对光的作用示意图物质对光的选择性

2、吸收－溶液对光的作用I0入射光辐射强度I透射光辐射强度T透射比a吸光系数ε摩尔吸光系数光吸收遵循朗伯-比尔定律：溶液对光吸收过程0.575光源单色器吸收池检测器显示仪器组成-单光束分光光度计双光束分光光度计比值光源单色器吸收池检测器显示光束分裂器组成：光源、单色器、样品池、检测器1．光源：①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长，价格低。 钨灯——可见光区320～2500nm氢灯或氘灯——紫外光区195－375nmU3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm2．

3、单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是：①入射狭缝——限制杂散光进入。②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。3.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英——适用于紫外和可见光区4．检测器：将光信号转变为电信号的装置光电管光电倍增管二极管阵列检测器5．记录装置：讯

4、号处理和显示系统Slit1不存在，Mirror取代了光栅grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋转镜将光分成两束，分别通过参比池和样品池，然后聚集在PMT开始程序启动按方法设定按钮扫描范围读数方式扫描速度按样品名输入按钮或将空白样品分别放入参比池和样品池进行用户基线校正按按钮将样品放入样品池开始测量按按钮开始测量打印数据按按钮打开数据处理界面数据检索峰值检出图谱平滑、求导二分光光度计的使用-波长扫描启动UVSolution软件打开仪器主机电

5、源。用鼠标点击Windows开始菜单中的[HitachiApplications]选项中的[UVSolutions2.0]选项。或者直接在桌面上双击UVSolution图标。2运行UVSolution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS232Port）见图仪器在初始化过程中进行如下自检工作：ROM检测RAM检测波长步进电机运转检测氘灯点亮检测钨灯点亮检测仪器波长校正3仪器主机开始初始化。见图4仪器主机初始化完毕，进入工作状态。5测量参数设置1在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列窗口。General:总体

6、设置页面Measurement测量:Wavelengthscan波长扫描Timescan时间扫描Photometry定波长测量Operator操作者:输入操作者的姓名Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。UseSampleTable使用样品表:选择是否使用样品表。Comments备注:填写一些备注信息。[Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。[Save]按钮:保存当前的设置参数。[SaveAs]按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。Instrument仪器参数设置页面Datamode读数显示方式，选择Abs

7、吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2Light一般选择“Auto”Monitor显示页面Processing数据处理页面Report报告结果页面样品名设置，备注信息及文件名输入基线校正用户基线校正方法：可将scanspeed设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮系统基线校正方法。使用空气作为参比和样品。按按钮出对话框见图，选择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。测　　量有两种方法可以开始测量：使用菜单方式选择[Spectrophotometer]菜

8、单下Start]选项开始测量使用按钮方式：按按钮　开始测量如果要终止扫描按按钮　。开始程序启动按方法设定按钮按样品名输入按钮或将空白样品分别放入参比池和样品池将样品放入样品池开始测量按按钮开始测量打印数据按