白蛋白微球的热变性对其水溶性及酶降解性的影响

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1、药学学报-7S;T(;P8;79CS>7;U>@>7;%###，’.（)）：.’./.’0·.’.·白蛋白微球的热变性对其水溶性及酶降解性的影响陆彬!，李凤前（华西医科大学药学院药剂学教研室，四川成都!"##$"）摘要：目的研究白蛋白喷雾干燥微球经加热变性后的水溶性及酶降解性，探讨热变性机理。方法用喷雾干燥工艺制成粉末状白蛋白微球，进一步加热变性处理。热变性条件分别为：温度"%#&，时间’!%$(；温度"##!"!#&，时间!(。用紫外分光光度法测定微球在水中的溶解百分率，在’)&的恒温水浴中以胰蛋

2、白酶的磷酸盐缓冲介质考察微球被酶解完全的时间。以傅立叶变换红外光谱法研究热变性引起白蛋白二级结构的改变。结果白蛋白微球的水溶性随热变性时间的延长和温度升高而显著降低，酶解时间也随之延长。热变性条件对蛋白质酰胺*谱带所表征的空间构象影响较大。结论加热变性程度对白蛋白微球的水溶性及酶解性均有显著的影响，这可能与白蛋白二级结构的改变及疏水性基团的暴露有关。通过选择适当的加热条件，可以调控白蛋白微球的体外溶解与降解特性，提示以白蛋白喷雾干燥微球作为药物载体时可调控载药白蛋白微球的释药速率。关键词：白蛋白；微

3、球；热变性；水溶性；酶降解性中图分类号：+,$’文献标识码：-文章编号：#."’/$0)#（%###）#)/#.’./#$白蛋白以其良好的生物相容性和生物降解性而质二级结构。与酰胺谱带构象敏感性有关的因素包广泛被作为药物微囊化材料，欲制得不变形、不粘连括氢键和迁移偶极子间的偶联，偶极子间的偶联使的白蛋白微球可采用化学交联（如甲醛、戊二醛或丁酰胺*谱带分裂，分裂的多少取决于相互作用的偶二烯等）或加热变性制得［"］，用喷雾干燥工艺一步极子取向及距离，从而提供多肽链中肽单位的几何成球即可制得白蛋白微球，其

4、制备工艺易于控制，易空间排列信息。本文采用562*+探讨热变性的机实现工业生产，且不受有机溶剂沾污［%］，作为非胃理，揭示热变性的影响规律。肠道给药系统的喷雾干燥白蛋白微球有重要的临床意义，而对其可生物降解特性的研究显得尤为重要。材料和方法文献［’］报道了化学交联法制得的白蛋白微球的体外酶降解情况，对于喷雾干燥白蛋白微球酶降解性仪器与材料GH7(>",#型喷雾干燥器（瑞士）；的研究目前尚未见报道。本文采用喷雾干燥法制备数显式恒温烘箱（本校詹先成教授研制，恒温I白蛋白微球，考察不同条件热变性对白蛋白微

5、球在#J"&）；G97K8;@LM2!$#型紫外分光光度计（美水中的溶解性以及在胰蛋白酶磷酸盐缓冲介质中的国）；N:?8OCD光学显微镜（日本）；-8P;?2"###G型酶降解性，并研究加热变性对白蛋白结构的影响。电子扫描显微镜（日本）；6Q’’%-半微量分析天平蛋白质结构分析常采用12射线结晶衍射和多（湘平，#J#"8A）；4;A@;2*+.!#傅立叶变换红外光维34+光谱法，但结晶衍射常需高纯度单晶，谱仪（3>7R:9S美国）；N8>@>7=DO红外软件（3>7R:9S34+图谱解析相当复杂。而

6、傅立叶变换红外光谱公司）；Q;:;7S>72T9;KUR:V9分峰软件；牛血清白蛋白法（562*+）可快速简便获取蛋白质谱图，且不影响（WRV>@9D9PC8;:WC8>@，GU-，上海丽珠东风生物技酰胺谱带各组分的相对强度，较适于探测蛋白质的术有限公司）；"X%.#胰蛋白酶（美国）。结构［$］。蛋白质的红外光谱提供了许多酰胺谱带，喷雾干燥法制备白蛋白微球［.］经蠕动泵进代表不同肽单位的振动，在这些肽单位的酰胺谱带样，通入压缩气流，喷雾干燥制得粒径为%!"##8中，酰胺*谱带（"!##!")##78

7、/"）常用于研究蛋白的白蛋白微球。工艺条件为：白蛋白水溶液浓度%Y，进样速度为%8Z·8>@/"；进风温度（"#0I收稿日期：",,,2"#2#0!69:：（#%0）..#"’,%，5;<：（#%0）..0’%.%，"）&；出风温度（.!I"）&；抽气泵0挡；气流量.##=28;>:：<7?;@A"B7C8DE9FCE7@Z·(/"；气流压力%.#KT;。将制得的粉末状白蛋白·AB>·药学学报Q).*N$*/1*),:.&)*(&+&)*#<<<，BA（"）：ABAHABF微球（图!）置于硅胶干燥器

8、中放置"#$备用。结果与讨论!热变性温度和时间对白蛋白微球水溶性的影响表!显示了不同热变性条件的白蛋白微球在水中的溶解性情况。白蛋白在水中的溶解百分率为!<