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《木瓜蛋白酶的化学修饰及对其酶活力的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、2009年第67卷化学学报Vol.67,2009第20期,2390～2394ACTACHIMICASINICANo.20,2390～2394·研究论文·木瓜蛋白酶的化学修饰及对其酶活力的影响薛勇李树白张海涛聂华丽*朱利民*(东华大学化学化工与生物工程学院上海201620)摘要用不同酸酐对木瓜蛋白酶进行化学修饰,以三硝基苯磺酸法(TNBS)测定修饰酶的平均氨基修饰度,对修饰前后的木瓜蛋白酶分别纯化并通过UV-vis和IR对其结构进行了表征.考察了温度、pH值和表面活性剂SDS对化学修饰的木瓜蛋白酶活力的影响,并与天然木瓜蛋白酶进行
2、了比较,对天然酶和修饰酶进行了动力学研究.结果表明,化学－1修饰木瓜蛋白酶的最适反应温度为80℃;最适pH值为9.0;在SDS浓度为5mg•mL时修饰酶酶活仍能保持在50%2左右;在所有酶中,均苯四甲酸酐修饰木瓜蛋白酶的催化效率最高,为2.442×10.与天然木瓜蛋白酶相比,化学修饰木瓜蛋白酶的热稳定性、耐碱性和耐洗涤性得到了显著提高.关键词化学修饰;木瓜蛋白酶;酸酐;动力学ChemicalModificationofPapainandEffectonItsEnzymeActivityXue,YongLi,ShubaiZhang
3、,HaitaoNie,Huali*Zhu,Limin*(CollegeofChemistry,ChemicalEngineeringandBiotechnology,DonghuaUniversity,Shanghai201620)AbstractPapainwasmodifiedusingdifferentanhydrides.Theaverageratioofmodified-NH2wastestedbyatrinitrobenzenesulfonicacid(TNBS)method.Thenativeandmodified
4、papainsampleswerepurifiedbydialysisandtheirstructureswerecharacterizedbyUVandIR.Thefactorsrelatedwiththeactivityofthemodifiedpapain,suchastemperature,pHvalue,kineticconstantandtheconcentrationofSDSwerestudiedandcomparedwiththoseofthenativepapain.Theresultsshowedthatt
5、heoptimumreactiontemperatureandpHformodifyingpapainwere80℃and9.0,respectively.WhentheconcentrationofSDSwas5mg•－1mL,about50%oftheactivityofthemodifiedpapainweremaintained.Amongthesemodifiedenzymes,theenzymemodifiedwithpyromelliticdianhydridewasfoundtobebestincatalytic
6、efficiency.Comparedwiththenativepapain,thethermalstabilityandtheresistanceofmodifiedenzymetoalkaliandwashingde-tergentwereimprovedconsiderably.Keywordschemicalmodification;papain;anhydride;kinetics[5]木瓜蛋白酶(EC3.4.22.2)又称木瓜酶,是一类半胱遭到破坏,使酶的生产和使用受到极大的限制.如何氨酸蛋白酶.广泛存在于番木瓜(C
7、aricapapaya)的根、提高酶的稳定性、解除抗原性、改变酶学性质、扩大酶茎、叶和果实内,其中在未成熟的乳汁中含量最为丰的应用范围,越来越引起人们的重视.[1,2]富,它对于多种蛋白质均具有很好的降解作用,能催酶的化学修饰就是利用化学手段将某些化学物质[3]化水解肽键、酯键、酰胺键,因此,广泛应用于医药、或基团结合到酶分子上,或将酶分子的某些部分删除或[4]食品、纺织、制革、饲料及染料等工业.由于天然木置换,改变酶的理化性质,最终达到改变酶的催化性质瓜蛋白酶在高温、重金属离子、极端pH等条件下,易的目的,创造出一些天然酶所不
8、具有的优良性能,提高*E-mail:niehuali2004@126.com;lzhu@dhu.edu.cnReceivedNovember27,2008;revisedMay4,2009;acceptedJune2,2009.国家自然科学基金(No.50773
