美国Caltag公司破膜剂(Fix&Perm)使用说明(中文)

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1、联科生物技术有限公司全国免费电话：8008571184传真：0571-88163303第五部分破膜剂(Fix&Perm)1)产品产品名称产品编号规格组分供应商ReagentA(固定剂)：1x5mlFIX&PERMGAS-00350testsCaltagReagentB(破膜剂)：1x5mlReagentA(固定剂)：4x5mlFIX&PERMGAS-003200testsCaltagReagentB(破膜剂)：4x5mlu储存方法和稳定性®FIX&PERM试剂应在室温下按说明书保存。在包装标明的期限内试剂是稳定的。当出现沉淀或o者变色时，试剂不能再使用。所有

2、的抗体则应在暗处2-8C保存。R-PE标记的抗体不能冷冻。u警告FIX&PERM®试剂盒中的试剂A包含甲醛，该物质有毒，致敏，为可疑致癌物，应避免与眼睛，皮肤和衣物接触。所有抗体都含有防腐剂叠氮钠。32全国免费电话：8008571184联科杭州：0571-88163118联科上海：021-64511079联科北京：010-51805911联科苏州：0512-68666623联科厦门：0592-53222277联科广州：020-83506317联科武汉：8008571184联科南京：025-8660929432联科生物技术有限公司全国免费电话：80085711

3、84传真：0571-881633032)FIX&PERM的特点美国CALTAG公司生产的FIX&PERM破膜剂被公认为目前世界上质量最佳的破膜剂，其特点为：Ø含有A液(固定剂)和B液(破膜剂)两个组分。其中B液同时具有破膜和溶血作用，因此对于全血标本，无需单独溶血；Ø破膜步骤简单，时间短，破膜剂可与针对待检测抗原的抗体一起加入标本；Ø对细胞形态影响很小，破膜后外周血白细胞仍可分为清晰的三群(淋巴、单核和粒细胞)，见图5；Ø破膜后细胞的非特异性染色少，可非常清楚地区分出阴性和阳性细胞群(如下图中的IFN-r)；Ø破膜试剂对细胞内抗原的改变最小。Groeneve

4、ld等曾对四种破膜剂(分别来自于四个知名的流式试剂生产厂商)进行过详细的分析[1，2]，结果如下表。从此表可以看出，这四种破膜剂对细胞散射光信号的改变均很小，但对细胞内抗原的改变程度则差异很大，只有来自CALTAG公司的FIX&PERM试剂能够将TdT,cyCD3,cyIg和MPO等四种细胞内抗原全部可靠地检测出来(表11)Ø可细胞内和细胞表面抗原同时检测，但要注意：先染细胞表面抗原，再用破膜剂固定和破膜，然后进行细胞内标记。图5人外周血用FIX&PERM破膜后的形态学表现表11商品化破膜剂对散射光及细胞内抗原的影响比较破膜剂对于散射光的影响TdTcyCD3

5、cyIgMPOFIX&PERM没有或很小++++Permeafix没有或很小+++-FACSPermeabilization没有或很小+---Optilyse没有或很小+---注：TdT,cyCD3,cyIg和MPO均为细胞内抗原，cy代表细胞内；+：可靠地检测出来；-：检测结果不准确。33全国免费电话：8008571184联科杭州：0571-88163118联科上海：021-64511079联科北京：010-51805911联科苏州：0512-68666623联科厦门：0592-53222277联科广州：020-83506317联科武汉：800857118

6、4联科南京：025-8660929433联科生物技术有限公司全国免费电话：8008571184传真：0571-881633033)FIX&PERM的适用抗原业已证实，下列细胞内抗原用FIX&PERM破膜剂破膜可得到很好的结果溶酶体蛋白癌蛋白细胞因子/细胞趋化因子ElastaseBcl-2人：IFN-gLactoferrinc-mycTNF-aLysozymep53IL1-bMyeloperoxidase(MPO)免疫球蛋白IL-2Proteinase-3人：IgA小鼠：IgGIL-4细胞浆CD分子IgGIgMIL-10CD3IgDRantesCD13IgM小

7、鼠：IFN-aCD22kIFN-rCD62plTNF-aCD63其它分子IL-2CD68MHCClassIIIL-4CD79aPhosphotyrosineIL-5核增殖标志ThrombospondinIL-10BrdUCMVAntigenHIV抗原Ki-67Cyclinsp24PCNATransfectedCells核酶MDR(Multi-DrugResistant)TdT4)FIX&PERM使用方法®对于大多数抗原来说，按下面的标准步骤使用FIX&PERM进行细胞内染色，都能达到最佳效果。而在使用FITC结合的抗体检测特定的细胞周期抗原如Ki-67和PC

8、NA时，需对此过程略加修改，使用预冷的无水甲醇，效果