复方丹参滴丸对大鼠肝

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1、复方丹参滴丸对大鼠肝P450酶系的诱导作用及其助致癌作用研究军事医学科学院毒物药物研究所北京100850复方丹参滴丸是我国率先打入国际市场的第一个传统中药；目前已在FDA进行临床试验。它能显著改善冠脉血流，保护心肌缺血，主要用于治疗冠状动脉供血不足和心绞痛。国内有一作者用咖啡因作为人肝脏CYP1A2的探药，发现复方丹参滴丸诱导后人肝脏该酶活性显著增高；亚慢性实验发现该药能选择性诱导大鼠肝CYP2B1活性增高，作者认为“该药可能存在[1,2]潜在致癌作用，值得注意”。该报道发表后对复方丹参滴丸创造的经济和社会效益造

2、成了较大的负面影响，引起有关当局和消费者极大的关注。细胞色素P450酶系是由多种同功酶组成的超大“家族”，广泛存在于生物体内，参与生物体内源性和外源性化学物的生物转化。与药物代谢作用有关的P450约有30多种，其中CYP1A1、1A2、2A6、2B、2D6、2E1、3A4与[3,4]药物或致癌物的代谢活化密切相关。本研究主要有以下两个目的：第一，观察大鼠经复方丹参滴丸诱导处理后肝细胞色素P450及CYP1A2、2B1/2、2E1、3A4亚型活性的变化，以评价复方丹参滴丸对肝脏细胞色素P450及其亚型是否有抑制或诱

3、导效应，为指导临床联合用药提供实验依据；第二，观察复方丹参滴丸诱导处理对原致癌物2-乙酰氨基芴(2-AAF)致突变作用的影响，以阐明复方丹参滴丸是否具有促致突变效应或助致癌作用。第一部分复方丹参滴丸诱导处理对大鼠肝细胞色素P450及其主要亚型的影响1材料与方法1.1实验动物雄性Wistar大鼠，清洁级，200－250g，军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号：BDW98012。动物常规喂养，自由饮水；饲养室光照10h，黑暗14h，温度21－25℃，湿度30－70％。1.2药物及主要试剂来源复方丹参滴丸由委托方提

4、供。第1页共12页多氯联苯购于日本西尾工业（株）；地塞米松购于Acros公司；resorufin购于Acros公司；7-methoxyresorufin购于Fluka公司；7-pentoxyresorufin购于Sigma公司；红霉素购于Amresco公司。1.3动物分组及诱导方式大鼠40只按体重由计算机随机分为8组，每组5只。各组诱导方案如下：A.空白对照B.多氯联苯(Aroc)：玉米油溶解，500mg/kg，一次性i.p.，5天后处死。C.苯巴比妥(PB)：生理盐水溶解，第1、2天60mg/kg/di.p.；

5、第3、4天80mg/kg/di.p.，第5天处死。D.地塞米松(Dex)：玉米油溶解，100mg/kg/di.p.，连续4天，第5天处死。E.乙醇(Eth)：蒸馏水配制，9g/kg/d，分两次灌胃，连续7天，第8天处死。F.复方丹参滴丸低剂量：125mg/kg/d灌胃（相当于临床用药剂量的10倍），连续5天，第6天处死。G.复方丹参滴丸中剂量：750mg/kg/d灌胃（相当于临床用药剂量的60倍），连续5天，第6天处死。H.复方丹参滴丸高剂量：4500mg/kg/d灌胃（相当于临床用药剂量的360倍），连续5天，

6、第6天处死。诱导结束后，将大鼠断头处死，去皮，75％乙醇消毒后，无菌条件下取出肝脏，称重，以0.15MKCl-0.2M蔗糖为匀浆介质，按1:3的比例在冰浴中制成肝匀浆，4℃下9000g离心20min，上清为S9。取一部分S9经干冰速冻后，于－70℃保存，用于Ames试验。剩余上清4℃下105000g离心60min制备微粒体，0.05MTris-0.25M蔗糖(pH7.6)混悬，干冰速冻后－70℃保存。1.4测定方法[5]用Lowry基本法进行微粒体蛋白定量，P450含量用CO吹泡法在450nm[6]和490nm差

7、示光谱测定；CYP1A2（7-甲氧基试卤灵O-脱烷基化酶，7-methoxyresorufinO-dealkylase，MROD）和CYP2B1/2（7-戊氧基试卤灵O-第2页共12页[7,8]脱烷基化酶，7-pentoxyresorufinO-dealkylase，PROD）用荧光比色法测定，CYP3A4（红霉素N-脱甲基酶，erythromycinN-demethylase，EMND）和[9,10]CYP2E1（苯胺羟化酶，anilinehydroxylase，ANH）用化学比色法测定。1.5统计处理采用SA

8、S软件包进行方差分析和Dunnettt检验。2结果2.1肝脏脏器系数多氯联苯、苯巴比妥、地塞米松诱导后肝脏脏器系数显著升高，复方丹参滴丸不同剂量诱导后肝脏脏器系数与正常对照组比较无显著差异（表1）。表1复方丹参滴丸诱导后大鼠肝脏脏器系数(x±s)组别剂量(mg/kg)脏器系数control—0.0290±0.0012**Aroc5000.0424±0.0015**PB60