发情周期不同阶段Ghrelin mRNA在猪下丘脑-垂体-卵巢轴的表达

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1、http://www.paper.edu.cn发情周期不同阶段GhrelinmRNA在猪1下丘脑-垂体-卵巢轴的表达1,21,*11张文龙雷治海苏娟宁红梅1南京农业大学动物医学院，江苏南京(210095)2西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌(712100)E-mail：leizh@njau.edu.cn摘要Ghrelin是一种主要由胃肠道分泌产生的28个氨基酸组成的多肽，具有促进生长激素释放、促进摄食、参与能量代谢平衡等多种生理作用，近年来研究表明ghrelin也参与动物生殖的调控。本文通过半定量RT-PCR技术研究了ghrelinmRNA在苏钟母猪发情周期不同阶段下丘脑-垂体-卵巢

2、轴的表达，20头苏钟母猪（体重75±5kg）分为4个组，即发情前期组（发情周期的第19天）、发情期组（发情周期的第21天）、发情后期组（发情周期的第3天）和间情期组（发情周期的第13天），每组5头。结果表明下丘脑、垂体和卵巢ghrelinmRNA在母猪发情周期不同阶段都有表达，并且在发情周期不同阶段表达丰度有规律性变化。下丘脑ghrelinmRNA的表达在发情前期水平最高（p<0.05），发情期最低；在垂体，发情前期和间情期mRNA表达水平明显高于发情期和发情后期（p<0.01）；而卵巢中GhrelinmRNA表达模式不同于下丘脑和垂体，在发情前期水平最低，然后逐渐升高，在间情期表达水

3、平最高（p<0.01）。结果提示Ghrelin可能在能量平衡和生殖的内分泌网络调节中发挥重要作用。关键词：Ghrelin；下丘脑-垂体-卵巢轴；发情周期；猪1.引言Ghrelin（生长素）是日本国立循环器病中心Kojima等人于1999年发现的一种多肽，由28个氨基酸组成，为生长激素促分泌素（Growthhormonesecretagogue）受体（GHS-R）[1]天然的内源性配体，能够促进生长激素（growthhormone，GH）释放，故命名为ghrelin。Ghrelin及其受体在动物体内广泛分布，具有调节GH分泌、摄食、能量代谢、生殖等多种生[2,3]物学作用，已引起人们广泛

4、的关注，成为近年的研究热点。研究表明在生殖和能量代谢之间存在着重要的相互联系。实验证实禁食可抑制动物促黄体生成素（LH）的分泌以及延迟动物青春期的启动和繁殖行为，如果解除动物的禁食，动物[4,5]则在数分钟到数小时内恢复LH的正常脉冲分泌。另一些实验证明，禁食抑制动物LH的[6]分泌，是因为禁食后GnRH分泌量减少而导致的。如果外部注射GnRH，则LH的分泌恢复正常。[7]性腺激素也可以通过多种途径影响能量代谢。Ghrelin对动物生长和能量代谢具有重要的调节作用，近年来的研究表明它参与对生殖的调控。Ghrelin及其受体在动物体内分布非常1*本课题得到高校博士点基金项目资助（Ghre

5、lin对猪生殖调控的研究，20070307021）。为通讯作者1http://www.paper.edu.cn广泛，在下丘脑-垂体-性腺轴上都有大量分布。成年雌性哺乳动物有典型的发情周期，在一个发情周期中下丘脑-垂体-卵巢轴各个水平的性激素发生典型的周期性变化，从而调节正常发情周期的进程。研究表明ghrelin在下丘脑-垂体-卵巢轴上对这些激素有调节作用，[8]Fernandez等在雄性和雌性大鼠的研究表明,脑室注射ghrelin可抑制青春前期以及性腺[9]切除大鼠LH的释放,而FSH的释放则不受影响。Fernandez-Fernandez等给去卵巢雌性大鼠静脉注射ghrelin后发现

6、在发情周期的各个阶段都能抑制LH的释放，也能抑制下丘脑GnRH的释放。体外实验证实ghrelin能剂量依赖性的提高垂体LH和FSH释放的基础水平。体外实验还表明ghrelin在大鼠整个发情周期都能抑制GnRH刺激引起的LH释放，而只在发情期抑制GnRH刺激引起的FSH释放。然而在一个发情周期中ghrelin本身的表达有什么特征尚未见系统[10]的研究报道。Caminos等采用RT-PCR和Southern杂交的方法，首次证明了ghrelin在大鼠卵巢中的表达状态，虽然ghrelinmRNA在整个性周期内均有表达，但在间情期第1天的表达量最高，发情前期的表达量最低，这种周期性表达模式正好

7、与黄体的功能相适应，因此提示ghrelin的表达与黄体的功能密切相关。但对猪下丘脑-垂体-卵巢轴上ghrelin在一个发情周期的表达模式文献中未见报道。因此本实验采用半定量RT-PCR方法对母猪下丘脑-垂体-卵巢轴ghrelinmRNA的表达模式进行研究，为ghrelin对生殖的调控提供实验依据。2材料和方法2.1试剂与仪器焦碳酸二乙酯(DEPC)、琼脂糖购自Sigma公司；M-MLV反转录酶和Oligo(dT)引物购自Promega公司；Tr