CYP450酶活性评价的体外“cocktail”模型的优化与应用

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1、中山大学硕士学位论文CYP450酶活性评价的体外“cocktail”模型的优化与应用姓名：刘柏东申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：黄民;黄芝瑛20090531广黟旗旎建设需将板梁整体顶升10咖左右，极有可能引起墩台顶面的桥面连续结构开裂，故支座更换后，必须对该桥面部分进行详细检查，如有裂缝出现，则必须采取以下措施对其进行处理：(1)划定需处理的区域，用切割机切割路面沥青砼，凿除，如沥青砼切割面积较水泥砼面积大，则将面层切缝错开；(2)划定需切除的砼桥面，用切割机切缝、凿除，在该项施工中应注意保留桥

2、面连续结构焊接钢筋规范长度；(3)焊接连续钢筋，清理，与旧砼相连浇砼桥面，养生，铺沥青砼路面。3结语桥梁橡胶支座的使用寿命不长，正常使用一定时间后易老化、变形，因此，在公路改建和桥梁养护中，支座的更换改造已成为亟需解决的问题。该施工方法可以使病害支座的更换更经济、便捷中山大学硕I：学位论文CYP450酶活性评价的体外“cocktail”模型的优化与应用结果：7．羟基香豆素／羟基丁氨苯丙酮／5．羟基奥美拉唑的线性范围分别为0．032／0．32／0．078／-2／20／5pM。三个质控浓度为：0．064／0

3、．64／0．156gM，0．25／2．5／0．625pM和1／10／2．51．tM。三者的萃取回收率分别为93．4．97．0％／75．6—87．9％／87．3—95．1％。三者的批内及批间精密度、准确度、稳定性的RSD及偏离度均小于15％。三者的基质效应分别为101．6—112．8％／86．5—96．4％／97．3．103．9％，而且是非浓度依赖型的，基质效应很小，不会影响检测，符合生物样本检测的要求。结论：建立了检测人肝微粒体中7一羟基香豆素、羟基丁氨苯丙酮、5．羟基奥美拉唑以及内标的浓度LC／MS／

4、MS方法，方法精密度、准确度好，灵敏度高，适用于后续研究。第二部分人肝微粒体体外“cocktail'’模型的建立与验证目的：优化人肝微粒体的体外孵育体系；比较探针在“individual'’和“cocktail"’模型中的各种代谢行为，以验证“cocktail'’模型的准确可行。方法：l、优化人肝微粒体的体外孵育体系。2、求算各种特异性抑制剂在两个模型中的IC50值，并进行比较来验证“cocktail”模型的准确可行。结果：1、优化后的人肝微粒体体外孵育体系为：总体积为0．2mL，蛋白浓度为0．25中山

5、大学硕．L学位论文CYP450酶活性评价的体外“cocktail”模型的优化与应用mg／mL，反应时间为20min。2、香豆素、丁胺苯丙酮、奥美拉唑的特异性抑制剂甲氧沙林(CYP2A6)，噻氯匹啶(CYP286)，氟康唑(CYP2C19)在“individual”和‘'cocktail”模型中ICso值分别为：6．39，l1．30；0．2557，0．2122；6．52，15．22gM。两者数值相近。结论：建立了优化的人肝微粒体的体外孵育体系；特异性抑制剂在“individual”和‘'cocktail”

6、模型中IC50值也相似，且与文献报道相似。证明“cocktail”模型准确可行，为后续的中药单体筛选奠定了基础。第三部分应用体夕b"cocktail’模型评价姜黄素类似物对CYP酶的影响目的：应用此“cocktail”模型对6种姜黄素类似物进行筛选，评价它们对3种CYPs亚型的抑制程度。方法：不同浓度的姜黄素类似物和底物混合液共同孵育，与空白对照(只含等量的溶剂)相比较，通过“二步法"来评价其对CYPs各个亚型的抑制作用。第一步：首先将每个姜黄素类似物设定3个浓度(1，lO，50gM)，进行初步地筛选，

7、判断其对CYP酶的抑制程度。第二步：根据第一步的结果，对于那些抑制作用较强的姜黄素类似物，设定合理的浓度范围(5或6个浓度点)，用GraphpadPrism来计算，进一步求算出确切的IC50值。结果：6种姜黄素类似物对CYP2A6、CYP2C19的IC50均大于50gM，无抑制影q-山大学硕士学位论文CYP450酶活性评价的体外“cocktail”模掣的优化与应用响；姜黄素类似物B及F对CYP286的ICso为分别为13．95taM及13．35taM，均是弱抑制剂。结论：应用体外cocktail法成功地

8、对6种姜黄素类似物进行了筛选。并筛选出两种体外有一定抑制能力的化合物，提示有可能会引起药物的相互作用。第四部分应用体外"cocktail’’模型对香豆素类中药单体进行抑制筛选目的：应用体外“cocktail'’模型对12种香豆素类中药单体进行筛选，明确它们对CYPs各个亚型的抑制作用。方法：通过“二步法”及GraphpadPrism来评价香豆素类中药单体对CYPs各个亚型的抑制作用并计算相应的Ic50值。结果：结果表明6一羟基．7一甲氧基香