浙江大学细胞培养绪论

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1、PlatformTechnologiesofBiology生物技术平台的两根支柱：细胞培养技术&单克隆抗体技术细胞培养技术林旭瑷副教授医学院病原生物学系林旭瑷：办公室:医学院科研C817电话:88208294实验室:科研C804～810E-mail:lxai122@163.com关于考试：开卷，实验课结束前上交（10.26-10.27）（A4纸张打印试题，手写答案附后）10+40+50参考书谷鸿喜，张凤民，凌虹.细胞培养技术.北京大学医学出版社，2012章静波.组织和细胞培养技术.人民卫生出版社，2011谭玉珍.实用细胞培养

2、技术.高等教育出版社，2010一、绪论二、细胞培养基础知识培养前准备/培养基/培养设备三、细胞培养基本技术培养技术/培养物的固定、染色/显微镜观察四、细胞培养中的细节问题内容组织培养的诞生与发展简史组织培养的优缺点组织培养常用术语组织培养的实际意义细胞系或细胞株的命名绪论细胞培养(cellculture)从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。细胞培养、组织培养和器官培养将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组

3、织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程。B、组织培养将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术。A、细胞培养C、器官培养是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。一、组织（细胞）培养发展史年鉴1878ClaudeBernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。1885WilhelmRoux:在一个生理溶液中维持一块鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关

4、。1907RossHarrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经嵴，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从而解决了神经纤维的来源问题。RossHarrison被人称为细胞培养之父。1910Burrows:率先在血浆凝块中长期培养鸡胚细胞。1911Lewis:以海水、血清、胚胎提取物、盐和蛋白胨为原料配制成了第一个人工的细胞培养液，并观察到了单层细胞的有限生长。1916Rous&Jones:开创用胰酶来收获贴壁生长的细胞。1923-1931Carrel:研制T型培养瓶大规模培养细胞。1927Carrel

5、&Rivera:制造了第一个病毒疫苗——牛痘疫苗。1933Gey:发明了转管培养细胞的技术。一、组织（细胞）培养发展史年鉴1948Fisher:研制成了第一个化学成分清楚的细胞培养液CMRL1006。1952Gey和同事:分离培养了HeLa细胞。1952Dulbecco:发明了噬斑法，用长满的单层细胞检测病毒。1954Abercrombie:观察到了体外培养细胞接触抑制的现象。1961Hatflick&Moorhead:发现人成纤维细胞在一定的代数之后会死亡。1965Ham:配制了第一个无血清培养液。1975KÖhler&Milst

6、ein:成功得到第一个用于单抗生产的杂交瘤细胞株。一、组织（细胞）培养发展史年鉴1.研究的对象是活细胞能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动等二、细胞培养的优点2.研究条件可以人为控制选择对象：均一性、重复性（类型/性质/阶段）调节条件：化学、物理、生物等因素条件研究方法：各种研究技术、记录方法3.研究的范围比较广泛学科多：细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类一种动物：不同年龄--不同组织：正常或异常（肿瘤--）二、细胞培养的优点4.研究的费用相对较经

7、济可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同。当细胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境中久了，必然发生变化。1.与体内主要不同相对孤立、单一缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响2.主要表现失去原有组织结构和细胞形态分化减弱或不明显,细胞趋向单一化二、细胞培养的缺点对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。提示三、常用术语初代培养/原代培养（pr

8、imaryculture）从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。初代培养物一旦进行传代培养后，就成为细胞系。通常10代以内的培养物用作原代培养。--有限细胞系（finitecellline）生存期有限的细胞系，不能继续传代或传代