浙江大学细胞培养基础知识

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1、培养前准备培养基培养设备细胞培养基础知识一、细胞培养物的生长生物学按生长方式粘附型细胞上皮细胞型成纤维细胞型游走细胞型多型细胞型各种实体瘤细胞悬浮型细胞造血系统肿瘤细胞体外细胞培养物的生长类型成纤维细胞：梭形、三角形、2-3个突起上皮细胞：扁平、多角形、圆核可连成单层(1)上皮型细胞(2)成纤维型细胞(3)游走型细胞(4)多形型细胞1234（一）贴附(粘附)型细胞粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式含义：细胞与细胞间接触，细胞与细胞外基质结合。结果：细胞与细胞之间相互结合形成组织，使细胞与其周围环境间始终保持联系，使有机体内几乎不存在“自由”的

2、细胞。培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。++++++++++++细胞的贴附过程贴附物质带正电荷细胞带负电荷细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物，乳腺外胚层消化道，呼吸道上皮内胚层内皮中胚层上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，但不完全相同上皮细胞型易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石

3、状生长时呈膜状移动很少脱离细胞群而单个活动上皮细胞型—生长特点成纤维细胞型名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。排列成放射状，漩涡状不紧靠连成片，细胞与细胞接触易断开而单独行动游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起成纤维细胞型—生长特点体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞具有类似巨噬细胞样的特征。经常处于较活跃的变形及游走状态，因此外形不规则且不断变化。当细胞密度增大相互连接成片时，

4、游走受限，形状上类似上皮型细胞或成纤维细胞型的细胞。表现这种形态的细胞主要是具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞，如颗粒性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肝枯否细胞(Kupffercell)以及某些肿瘤细胞等。游走型细胞多形型细胞是一些形态上不规则的细胞，细胞一般分胞体和胞突两部分：其胞突为细长形，似丝状伪足。胞体虽略呈多角形，但没有成纤维细胞型那样不规则。体外培养中呈现多形型的细胞最常见的类型是神经元和神经胶质细胞。多形型细胞细胞形态并非固定不变，可随培养条件、生长时期、细胞数量等而变化细胞形态只是对培养物判断或识别的参考指标若要确定某一培养物的确切细胞类型，必

5、须借助更为特异的鉴定方法，如进行组织化学或免疫细胞化学染色鉴定。注意：培养细胞形态不稳定血清Hela高血清低血清成纤维细胞样上皮样细胞pHHela太酸或太碱标准pH成纤维细胞样上皮样细胞细胞密度3T3低密度高密度成纤维细胞样上皮样细胞生长状态改变悬浮贴附圆形成纤维或上皮样转化与否未转化转化成纤维样上皮样（二）悬浮生长型概念培养时不贴附于基质而呈悬浮状态生长，或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源自血，脾或骨髓，尤其血中白细胞，癌肿细胞也可能特点在悬浮中生长良好，细胞圆形，单个或小细胞团优点生存空间大，提供数量多传代方便(不需消化)易于收获可获得稳定状态缺点观察不方便很多细

6、胞不能悬浮生长(尤其正常细胞)二、培养细胞的生长和增殖过程分裂增殖和生长发育是体外培养细胞的两大生命特征增殖能力一般与该种细胞在体内的增殖能力相仿（一）组织培养细胞生命期(LifeSpanofCultureCells)在培养中持续增殖和生长的时间。原代培养期、传代培养期、衰退期。1、原代培养期(PrimaryCulturestage)也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。2、传代期(passagestage)特点：在全生命期中此期的持续时间最长，

7、细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型。传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系（CellLine）。原代培养　　　传代培养镜下观察选取生长良好的细胞加入胰蛋白酶消化液倒去酶液，加入培养液反复吹打制成细胞悬液按比例分装后培养一代贴附生长细胞的生长过程游离期贴壁期潜伏期对数生长期停止期（平台期）体外培养细胞一代生存期潜伏期指数增生期停滞期所