《细胞培养基础知识》PPT课件

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1、细胞培养王爱云参考书司徒镇强《细胞培养》细胞培养的基本概念传代细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。原代培养取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。细胞培养：使用单个细胞悬液组织培养：使用组织块（O.5～1立方毫米）或薄片（厚0.2毫米）器官培养：使用器官原基或器官的一部分或整个器宫原代培养细胞的生命归宿原代培养期传代期衰退期有限细胞系，无限细胞系细胞系cellline细胞株cellstrain（就是从细胞系筛选出来的，有特殊属性的）细胞来源国内细胞库:1.武汉细胞库http://www.cctcc.org/fzlbc/cell.doc2

2、.昆明细胞库http://vkz.brim.ac.cn/CELL.HTM3.上海细胞库http://www.ctcccas.ac.cn/xibao/catalogue.html4.协和医科大学基础医学细胞中心http://www.cams.ac.cn/pumc/jiaoxue_hj/zhongdian_sys.htm5.成都基因治疗肿瘤药物工程技术研究中心细胞及载体服务http://www.genemedicine.com.cn/cell_catalog.asp6.中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库http://www.cellbank.org.cn/7.南京中医药大学新药及海洋药物

3、研究中心药理毒理研究室细胞库目录http://202.195.210.5/web/keyanziyuan/haiyangcell1.htm8.中国医学科学院基础医学研究所细胞中心保藏细胞目录http://bionon.nease.net/cellhouse.doc美国和欧洲细胞库1.ATCC（细胞株及胚胎干细胞库）：http://www.atcc.org2.欧洲细胞实验室列表（大全）http://www.biotech.ist.unige.it/cldb/labs.html培养细胞的特性培养细胞的生长方式贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞悬浮生长：于悬浮状态下即

4、可生长，不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞每代贴附生长细胞的生长过程游离期贴壁期潜伏期对数生长期停止期（平台期）游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟—4小时贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）潜伏期此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～

5、24小时。对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂机制：接触抑制、密度依赖性培养细胞生长的条件1细胞的营养需要2细胞的生存环境温度:37℃O2CO2:5%CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-pH:7.2-7.4渗透压3无污染4无毒实验准备实验用品超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，滤器，酸缸CO2培养箱倒置显微镜酶标仪、微孔板震荡器液氮罐自动双重纯水蒸馏器，纯水仪耗材：培养瓶，吸管，电动吸引器，培养板，冻存管压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用

6、干玻璃器皿消毒滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌超净工作台：为细胞操作提供无菌环境紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。三洋灭菌器滤器CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒(90℃，14h)。③箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏

7、水槽中以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。自动双重纯水蒸馏器纯水仪微孔板震荡器酶标仪培养板培养瓶，培养皿移液管，移液枪常用玻璃器皿清洗浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干清洁液的配制2细胞培养用液的配制水：新鲜配置的三蒸水或去离子水平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20加水至1000ml消化液：胰蛋白酶作用