悬铃木叶片体外器官和体细胞胚胎发生及植株再生研究

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1、河南农业大学硕士学位论文悬铃木叶片体外器官和体细胞胚胎发生及植株再生研究姓名：贺窑青申请学位级别：硕士专业：森林培育指导教师：范国强;黎明20030601致谢本实验是在范围强教授和黎明副教授的悉心指导下完成的，从立题到选材、从实验具体操作到论文的写作与修改都倾注了导师的大量心血。在三年的研究生生活rI．I，二位老师谦虚的品德、严谨的治学态度、忘我的．，【：作精神和创新思想使我收益匪浅，并将对我今后的工作和生活产生深远的影响，三年来导师对我的淳淳教诲和潜心培育，将令我终生难忘。蒋建平教授⋯直关注着实验的设计与实施，入学以来无论从学

2、习还是生活都给予了我大量的指导和帮助，在此表示衷心的感谢!在三年的学习中，得到了导师组李淑玲教授、冯建灿教授、刘震剐教授、杨喜⋯剐教授和茹广欣剐教授的热情指导。同时得到了研究生处和林学园艺学院的各位领导和各位老师的关心和帮助，在此一-jr表示诚挚的感谢!在实验的过程中，博二L翟晓巧，同f-jij币弟马新业、李锋，师姝冯志敏、杨小娟在平时的学习、生活和实验中给予了大量的支持，实习本科生也给予了大量的帮助，在此表示深深的感谢!在论文完成之际，对一直在学习和二[作中默默给我关心和帮助的老师、同学、亲人和朋友致以深深的谢意!贺窑青200

3、3．6摘要悬铃木足我国园林绿化的主要树种之一，具有较强的净化空气和遮阴能力，观赏性较强，木材可供建筑和家具等用，是集生态、经济和社会效益为一体的品质优良的树种。但随着树龄增大，其果毛污染成为社会环境的一大公害，为通过植物组织培养的方法从理论上研究悬铃木的不育机理，同时为不育转基因悬铃木的培育建立一个良好的基因转化受体系统，本文以悬铃木的II-14片为外植体，通过正交试验和单因子试验，借助于细胞组织学观察，研究了不同基本培养基、植物激素不同浓度组合、不同温度处理、叶位和培养时间对诱导叶片形态发生及植株再生的影响，结果表明：叶片诱导

4、植株再生的最佳基本培养基为WPM，非胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为WPM+O．6IBA+8．06一BA、适宜培养20天，胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为WPM+O．1IBA+5．06一BA、适宜培养25天，非胚性愈伤组织诱导不定芽的最佳培养基为WPM+O．1IBA+5．06一BA、适宜培养50天，胚性愈伤组织体细胞胚胎发育的最佳培养基为WPM+O．56一BA、适宜培养45天，叶片不定芽诱导的最佳培养基为WPM+O．iIBA+3．06一BA、适宜培养50天，最佳根诱导培养为I／2MsO．1一O．5IBA、最佳胚状体苗发育的培养基为W

5、PM；接种的叶片组织或愈伤组织在经10℃低温预处理3天后，置于25。C温度条件中培养，可不同程度的提高诱导率；叶片植株再生所用外植体以无菌苗的第七片真叶完全展开后从其基部往上数第五片叶不定芽诱导率最高；在培养过程中，生长素IBA有利于愈伤组织的诱导，细胞分裂素6-BA有利于不定芽的诱导，zT对愈伤组织及不定芽的诱导有抑制作用；在开始对叶片愈伤组织的诱导中需要较高浓度的生长素和细胞分裂素，在诱导不定芽和体细胞胚时需降低它们的浓度，而在体细胞胚胎发育过程中不需要生长素，仅附加细胞分裂素；米黄色、微紧的愈伤组织是器官发生的主要愈伤组织

6、，褐、紫红色、微松的愈伤组织是体细胞胚胎发生的主要愈伤组织，这些结果为悬铃木采用不同的方式培育新品种提供了基础。关键词：悬铃术；培养基；愈伤组织；不定芽；体细胞胚；诱导率；温度；培养时问1文献综述森林是一利，非常重要的自然资源，它不仅可以生产木材及其它林副产品，而且能维持生态系统平衡、改造自然、保护和美化环境。但由于森林的迅速破坏及遗传资源的枯竭，为了充分发挥其各种效益，就必须快速和大量繁殖现有的、重要的、优质的和濒临绝灭的珍贵稀有种质资源及通过遗传变异、杂种选育和基因操作等方式增加新的种质资源，以满足人们的各种需求。因此，随着

7、植物组织培养研究工作的不断深入和发展，以林木的组织培养为基础，可以为克服林木常规育种的生长周期长，在自然界中遗传上高度杂合的缺点，获得各种树种的优良品种或纯系及为优良树种的快速繁殖提供一种快捷的方法。更重要的是在应用细胞生物学、分子生物学、生物化学和遗传理论的基础一L，可按照人们的设计蓝图，有计划的通过组织和细胞培养进行突变诱导、细胞融合和基因工程，为选育出新的优良物种或品系开辟了新的途径。1．1快速无性繁殖对植物而言一般是通过有性繁殖和无性繁殖两种方式繁衍后代的。作为林木用有性繁殖的方法获得一个新的优良品种，从选育培育到生产上

8、的大面积应用，不仅需要一段很长的时间，而且一些用种子繁殖的异交树种，由于严重的性状分离，要保持其新品种的优良性状是十分困难的。如利用组织培养繁殖植物，通过脱分化的外植体，经器官发生途径和体细胞胚胎发生途径再生为完整植株的快速无性繁殖技术，就会在短期内获得大量遗传