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1、《环境微生物》实训报告学生姓名:学号:专业:系部:指导教师:2011年12月30日7实训一校园中水回用微生物指标的检验一、目的要求(1)熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。(2)掌握培养基的配制原理。掌握培养基和无菌水制备的一般方法和步骤。(3)了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。熟悉高压蒸汽灭菌的操作方法。(4)掌握从环境中分离培养大肠杆菌、从而获得大肠杆菌培养物的技能。(5)了解温度对微生物生长的影响与作用机制,学习最适合生长温度的测定。(6)了解某些化学药剂对微生物的抑制作用。二、仪器材料15mm×150mm试管若干支。移液管lmL若干支。纱布、棉花、牛皮纸(或报纸)。乳
2、糖胆盐培养基中水。高压蒸汽灭菌锅、烘箱、酒精灯。中水1瓶三、实训内容1准备(1)查阅相关检验标准(GB/T18920-2002);(2)玻璃器皿的洗涤、烘干(3)玻璃器皿的包装①移液管②试管2.培养基的制备:总大肠菌群的培养基3.无菌稀释水的制备4.灭菌①干热灭菌法:160℃~170℃,灭菌2h②高压蒸汽灭菌法:0.105MPa,15~30min5.培养(1)取样(2)接种(3)发酵管37℃培养24h;四、结果和讨论(1)双倍乳糖蛋白胨加5mL水样图片:分析:产酸产气,经24小时培养后,试管颜色稍微转变为棕黄色,且有三支试管中的小试管中有气泡,说明水样中有总大肠菌群存在。7(2)单
3、倍乳糖蛋白胨加0.5mL水样图片:分析:经24小时培养后,试管颜色没有太大转变,且试管中的小试管也没有气泡,不能证明水样中有总大肠菌群存在。(3)单倍乳糖蛋白胨加稀释十倍后0.5mL水样图片:分析:24小时培养后,试管颜色由紫色变为棕黄色,且有两个试管中的小试管中有气泡产生,说明水样中有总大肠菌群存在。综合上述实验结果,查《生活饮用水标准检验方法——微生物指标》(GB/T5750.12-2006),总大肠菌群数为20MPN/100Ml。7实训二活性污泥性能的监测一、目的要求1、学习观察活性污泥(或生物膜)及其生物相的方法。2、初步掌握根据活性污泥(或生物膜)及其生物相,推断污水生物
4、处理系统工作状态的技能。3、了解比色法测脱氢酶的活性的原理。掌握比色法测脱氢酶的活性方法。4、通过测定不同工业废水中活性污泥脱氢酶活性,评价工业废水成分的毒性以及可生物降解性。二、仪器材料活性污泥、显微镜,擦镜纸,微型动物计数板,目镜测微尺、载玻片,盖玻片,吸水纸,滴管。722型分光光度计、恒温器、离心机(4000r/min)、离心管、移液管、试管。Tris-HCl缓冲液、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)、亚硫酸钠、丙酮(或正丁醇及甲醇)、硫化钠、浓硫酸。三、实训内容1).制片镜检(1)样品准备(2)制作样片(3)水浸片观察(4)染色片观察2).污泥絮粒大小测定(1)制作样片
5、(2)校正目镜测微尺(3)测定絮粒直径(4)污泥絮粒分级3).污泥絮粒形状和结构分析(1)制作样片(2)观察絮粒形状和结构(3)污泥絮粒分型4).污泥絮粒中丝状细菌数量测定(1)制作样片(2)标本镜检(3)丝状细菌数量分级5).观察原生动物和后生动物。6).SV、MLSS、SVI测定7).活性污泥脱氢酶活性测定(1)标准曲线制备(2)活性污泥脱氢酶活性的测定7四、结果和讨论(1)将镜检和计数的结果填入表1。表1活性污泥形态的观察絮体形态不规则形粒径的大小絮体结构开放;封闭絮体的紧密度疏松丝状菌的数量±丝状菌的长度游离细菌几乎不见原生动物和微型后生动物的名称无(2)绘制所观察到的菌胶
6、团以及相关原生动物和微型后生动物的形态图。7(3)标准曲线的制备将标准曲线测定时的数值填入实验表2中。表2标准曲线OD实测值TTC/μg20406080100120140OD值0.0170.0390.0760.1120.1370.1960.239(4)根据实验表2中数据,以TTC为横坐标,OD值为纵坐标得出标准曲线方程。(5)活性污泥脱氢酶活性的测定①将样品组的OD值(平均值)减去对照组OD值后,通过标准曲线方程求出TTC值。不加基质的OD值为0.042,加基质的OD值为0.05,对照组OD值为0平均值减去对照组后的值为:1/2(0.042+0.05)—0=0.046②计算样品组(
7、加基质与不加基质)脱氢酶活性X’(TFμg/mL活性污泥·h)=A×B×C式中 X’——脱氢酶活性;A——标准曲线上的读数;B——反应时间校正=60min/实际反应时间;C——比色时稀释倍数加基质:X=A×B×C=43.21×60/11×1=235.69μg/mL活性污泥·h不加基质:X=A×B×C=39×60/11×1=212μg/mL活性污泥·h(6)根据观察情况,评价污水生物处理装置中活性污泥质量及其运行情况。活性污泥质量不好。污水生物处理运行情况不好。7四、实
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