环境微生物实验

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1、实验内容实验一显微镜使用及微生物观察（教材实验一）实验二培养基的配制和灭菌（教材实验六）实验三微生物的接种计数（教材实验七）实验四细菌革兰氏染色（教材实验四）实验五水中大肠杆菌群的测定（教材实验十）实验一显微镜使用及微生物观察一、实验目的1.掌握显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作和保养方法2.观察细菌的形态、尺寸，并绘图二、仪器和材料光学显微镜、擦镜纸、香柏油、二甲苯、细菌标本三、实验步骤1.显微镜的取送：①右手握镜臂；②左手托镜座；③置于胸前。2.显微镜的旋转：①镜筒朝前，镜臂朝后；②置于观察者座位前的桌子上，偏向身体左侧，便于左眼向目镜内观察；③置于桌子内侧，距桌沿5cm

2、左右。3.对光：①转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，然后转动转换器，使低倍物镜对准通光孔；②用手指转动遮光器（或片状光圈），使最大光圈对准通光孔，左眼向目镜内注视，同时转动反光镜，使其朝向光源，使视野内亮度均匀合适。4.低倍物镜的使用：①用手转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐下降，同时两眼从侧面注视物镜镜头，当物镜镜头与载物台的玻片相距2～3mm时停止。②用左眼向目镜内注视（注意右眼应该同时睁着），并转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止。如果不清楚，可调节细准焦螺旋，至清楚为止。5.高低倍物镜的使用6.油镜的使用：A、将标本片放载物台上，用标本推进器固定，将欲检部分移至接物镜

3、下。先用低倍镜找出标本的位置，然后提高镜筒，在标本的待检部位滴香柏油一滴，再换油镜观察。B、转动粗调节器使载物台徐徐上升（或使镜筒渐渐下降），直至油镜头浸没至油中。此时眼睛应从侧面观察，以免压碎标本片和损坏镜头。C、然后双眼移至接目镜，一面从接目镜观察，一面反方向缓慢地转动粗调节器（下降载物台，或上升镜筒），当出现模糊物象时，换用细调节器，转动至物象清晰为止。D、观察完毕，应先提高镜筒，并将油镜头扭向一侧，再取下标本片。油镜头使用后，应立即用擦镜纸擦净镜头上的油。若镜油粘稠干结于镜头上，可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，并随即用干的镜纸擦去残存的二甲苯，以免二甲苯渗入，溶解用以粘

4、固透镜的胶质物，造成镜片移位或脱落。7.镜头的擦拭：①用专门的擦镜纸；②擦镜头时，先将擦镜纸折叠几次，然后朝一个方向擦，不可来回擦或转动擦；③如果镜头被油污污染，则可在擦镜纸上滴几滴二甲苯，然后按上述方法擦拭。8.显微镜的放大对象：是物体的长和宽，不是面积，更不是体积。9.显微镜的焦距问题：物镜离装片的远近，准焦螺旋的使用。10.显微镜使用时物象移动方向：相反，即物象在视野何方，则装片即向该方向移动。11.显微镜使用时异物的判断：目镜、物镜或装片上，通常通过移动玻片（是否在玻片上），转动转换器（是否在物镜上）来判断，剩下在目镜上。12.实验后显微镜的安置：显微镜使用完毕后，应将

5、玻片取下，将其机械部分用白纱布擦拭干净；转动转换器，让两个物镜偏于两旁；转动粗准焦螺旋，使镜筒下降至最低点，将反光镜竖起，蒙上红绸布，然后将显微镜锁入箱内13.显微镜的保养①避免直接在阳光下曝晒②避免和挥发性药品或腐蚀性酸类一起存放③透镜要用擦镜纸擦拭或醮二甲苯擦拭④不能随意拆卸显微镜，尤其是物镜、目镜、镜筒不能随意拆卸⑤避免用手指沾抺镜面⑥显微镜放在干燥处四、实验结果名称形态大小无芽孢杆菌杆状1.0µm×（1～5）µm五、注意事项1.用显微镜观察微生物不清楚时，可对光圈（强大、弱小）、滤光片、聚光器进行调节。2.细调时可先微微向一个方向调节，如果物像越变越清晰则继续朝原方向调

6、节，反之逆向调节六、思考题使用油镜时，为什么先要用低倍镜观察？实验二培养基的配制和灭菌培养基是用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素外还应具有适宜的酸碱度〔pH值〕、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。二、实验器材(1)药品和试剂：牛肉膏、蛋白陈、NaCl、10％NaOH溶液、l0％盐酸溶液、琼脂。(2)器材：小烧杯、小铝锅、天平、牛角匙、1000mL刻度烧杯、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉花、三角烧瓶、移液管、蒸馏水、培养皿。(3)高压蒸汽灭菌

7、锅、电热烘箱一、实验目的1、熟悉洗涤、包装、稀释水配制操作2、学习和掌握配制培养基的原理方法和步骤3、掌握消毒和灭菌的原理方法的操作步骤三、方法与步骤1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制(1)培养基配方：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g、NaCl5.0g、琼脂20.0g、自来水1000mL、pH7.0。(2)操作步骤：1）称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品随后放入盛有蒸馏水的大烧杯中，牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，再放入热水，牛肉膏便与称量纸分