卵巢上皮性肿瘤DNA倍体分析及 P53 表达意义

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1、卵巢上皮性肿瘤DNA倍体分析及P53表达意义【摘要】目的：观察卵巢上皮性肿瘤(EOT)患者核DNA含量、P53蛋白表达情况,研究其与生物学行为之间的关系及临床鉴别诊断的意义。方法：采用流式细胞术对162例卵巢上皮性肿瘤(EOT)石蜡包埋组织进行肿瘤单细胞DNA倍体分析；同时,采用流式细胞术对P53蛋白表达进行检测。结果：53例良性肿瘤DNA倍体检测均为二倍体；43例交界性中检出异倍体11例,二者有显著差异。恶性EOT与交界性EOT和良性EOT比较均有显著差义。P53阳性表达恶性EOT与交界性EOT和良性EOT比较均有显著差义。显著高于后二者(X2=34.719,P＜0.0

2、01)。结论：P53阳性表达与DNA异倍体密切相关,可能是肿瘤发生的机制之一。【关键词】卵巢上皮性肿瘤DNA倍体分析流式细胞术基因P53　AbstractPurpose:ToobservethenuclearDNAcontentsandP53expressionofthepatientswithepithelialoariantumors(EOT)andtostudythebiologicalbehaviorsandtheclinicalsignificanceofthedifferentialdiagnosis.Methods:Tumorsingle-celledDNA

3、ploidywereanalyzedbyflowcytometryfor162paraffinspecimensofEOT,aswellastheexpressionlevelofP53.Results:DNAploidyof53caseswithbenigntumorwerediploid.11casesofheteroploidweredetectedin43specimensofborderlinetumor.Thereweresignificantdifferencesbetweenaforementionedgroups.MalignantEOTcompared

4、withborderlineEOTandbenignEOTweresignificantdifferent,aswellasthepositivityofP53.Conclusions:ThepositiveexpressionofP53andDNAheteroploidarecloselyrelated,andmightbeoneofthemechanismsofoncogenesis.KeyWordsepithelialovariantumor;DNAploidyanalysis;flowcytometry;gene;P53卵巢来源的良、恶性肿瘤是临床常见肿瘤，以组织

5、细胞学形态为主要根据判断其良、恶性有时相当困难。本研究采用流式细胞术对良、恶性卵巢肿瘤进行DNA倍体检测分析，同时佐以免疫组化法检测P53表达，以探讨其与组织细胞学形态的关系和对临床鉴别诊断的意义。资料与方法2003～2009年确诊为卵巢肿瘤的石蜡包埋组织标本162例，年龄35～68岁，平均48±12岁。162例EOT中，卵巢浆液性肿瘤77例，其中良性囊腺瘤21例，交界性囊腺瘤24例，浆液性囊腺癌32例；卵巢黏液性肿瘤85例，其中良性囊腺瘤32例，交界性囊腺瘤19例，黏液性囊腺癌34例。所用组织学标本均为石蜡包埋病理组织。流式细胞术：①石蜡包埋组织的单细胞悬液的制备：50

6、μm厚的石蜡包埋组织连续切片5张，经二甲苯脱蜡48小时；体积分数1.00、0.95、0.70、0.50的梯度乙醇水化；加入3ml胶原酶消化液，置37℃恒温水浴中作用消化30分钟；尼龙网过滤，收集细胞悬液，1500转/分钟离心沉淀；PBS液漂洗，1000转/分钟离心沉淀。全部病例均制备细胞悬液涂片，保证镜下观察保留完整的细胞核；再行核酸染料标记DNA(DNA倍体分析试剂，BECKMANCOULTER公司)；30分钟后上流式细胞仪进行检测分析，获得细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。②DNA倍体分析：采用细胞周期和DNA分析软件(MultiCy

7、cleAVforWindowsadvancedDNACellCycleAnalysisSoftware)进行各项指标的分析。DNA指数(DI)在1.0±2CV之间(0.90～1.10)为二倍体，不在1.0±2CV之间为异倍体。免疫组化检测：一抗为鼠抗人P53单克隆抗体(购自SANTACRUZ公司)，工作浓度为1∶100，实验参照说明书的方法步骤进行操作，以乳癌P53阳性病例作为阳性对照。阳性判断标准：P53阳性信号呈棕黄色颗粒状，位于细胞核；阳性细胞数＜1%为阴性，1%～24%为阳性。统计学处理：采用SPSS10.0统计软件进