VE对去卵巢大鼠血清TSOD、GSHPX活力与心肌细胞凋亡的影响

《VE对去卵巢大鼠血清TSOD、GSHPX活力与心肌细胞凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、VE对去卵巢大鼠血清TSOD、GSHPX活力与心肌细胞凋亡的影响作者：李政媛,张婷婷,陈宇豪,国智超,张翔,赵单位：吉林医药学院，吉林吉林【摘要】目的以去卵巢大鼠为更年期动物模型,观察心肌细胞抗氧化能力与凋亡的变化，探讨维生素E（VE）对老年心肌细胞凋亡的影响机制。方法以正常成年大鼠（假手术组）和去卵巢大鼠（老年对照组）为对照，实验组大鼠腹腔注射VE：5mg/kg（小剂量组)、15mg/kg（大剂量组)，连续注射9周。采用比色法测血清中总超氧化物歧化酶(TSOD)与心肌组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶（

2、GSHPX）活力，Hoechst染色法检测细胞凋亡。结果实验组大鼠血清TSOD与心肌GSHPX活力高于去卵巢大鼠，低于假手术组；大剂量组TSOD与GSHPX活力高于小剂量组；Hoechst荧光染色显示，VE大剂量组大鼠心肌细胞凋亡明显少于小剂量组，但多于假手术组，小剂量组心肌细胞凋亡与去卵巢组相似。结论大剂量VE可提高心肌抗氧化能力，减少心肌细胞的凋亡，延缓围绝经期妇女心肌细胞的衰老。【关键词】维生素E总超氧化物歧化酶谷胱甘肽过氧化物酶维生素E（VE）是具有抗氧化作用的维生素，其结构与雌激素相似

3、，可通过抑制自由氧对细胞的氧化而起到保护细胞、延缓衰老的作用。VE对生殖系统的功能维持也具有重要作用，研究表明［1］，对于自然衰老雌性大鼠，VE通过抗氧化、抗自由基作用，可延缓卵巢细胞的衰老，提高血清雌激素水平，通过雌激素受体表达的上调，增加抗氧化酶的表达来起到减少心肌细胞凋亡的作用。但在体情况下，VE单独作用对减少心肌细胞凋亡的作用并未进行揭示。本研究用去卵巢大鼠为衰老动物模型，给予不同剂量的VE，观察VE对衰老大鼠心肌细胞凋亡的影响，进一步探讨VE对心肌细胞凋亡影响的机制。1材料与方法1.1模型制备与

4、处理Wistar成年雌性大鼠32只，10月龄,体重(230±20)g，购于吉林大学白求恩医学部实验动物中心。随机分成4组：正常对照组（假手术组）、去卵巢对照组（老年组）、去卵巢小剂量VE组、去卵巢大剂量VE组。大鼠适应1周后，腹腔注射1%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉,固定,背部切口去双侧卵巢，假手术组切除一小块脂肪,分层缝合。去卵巢1周后,阴道涂片,已无性周期变化。对照组大鼠腹腔注射植物油,实验组大鼠按5mg/kg和15mg/kg腹腔注射VE,每日1次,持续9周。1.2实验材料VE注射液

5、购于上海通用药业股份有限公司；植物油为食用色拉油；总超氧化物歧化酶(TSOD)、心肌谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPX）活力及Hoechst凋亡试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。1.3生化指标的测定大鼠摘眼球取血，4℃冰箱静置过夜，3000r/min离心10min，取上清液，-20℃冰箱保存待测。血清TSOD活力采用黄嘌呤酶法。以铜锌SOD(CuZnSOD)与锰SOD（MnSOD）相加为TSOD。每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个活力单位。测定时每份血清样品取20&m

6、u;l，按试剂盒说明书操作，结果以活力单位/毫升（U/ml）表示。取心肌组织匀浆后离心取上清液，稀释至2%，取样品0.2ml测GSHPX活力。规定为每毫克蛋白质，每分钟扣除非酶反应的作用，是反应体系中GSH浓度降低1μmol/L为1个酶活力单位，结果以活力单位/毫克蛋白（U/mgpro）表示。1.4Hoechst检测细胞凋亡剪下心脏，主动脉逆行插管，用100ml预冷的生理盐水(4℃)灌注心脏后，换以40g/L多聚甲醛灌注固定1h，然后置入同浓度多聚甲醛溶液中浸泡固定10h，常规石蜡包埋及组织切片，

7、片厚5μm，常规脱蜡处理后进行Hoechst33258染色，荧光显微镜观察拍片。1.5统计方法实验数据用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS11.0统计软件包，进行组间t检验。2结果2.1TSOD活力、GSHPX活力比较各组血清TSOD活力、心肌匀浆GSHPX活力比较见表1。表1可见，老年对照组TSOD、GSHPX活力明显低于假手术组（P<0.01）；实验组大鼠的TSOD、GSHPX活力明显低于假手术组（小剂量组P<0.01，大剂量组P<

8、;0.05），实验组大鼠与老年对照组相比TSOD、GSHPX活力虽有所增加，但无显著性差异，大剂量组TSOD、GSHPX高于小剂量组，亦无显著性差异。2.2HoechstPI染色法检测细胞凋亡大鼠心肌细胞凋亡情况如图1，蓝色荧光表示发生凋亡的心肌细胞，荧光强表示凋亡程度重。由图1可见，假手术组只有少数荧光，细胞凋亡少；大剂量组染色较多，细胞凋亡比假手术明显增多；小剂量组与表1大鼠TSOD和GSHPX活力比较与假手