掌握层析CHROMATOGRAPHY的概念

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1、层析CHROMATOGRAPHY掌握：层析的概念、一般原理凝胶层析的基本原理装层析柱的过程及装柱要求熟悉：层析技术的分类凝胶层析的特点凝胶的结构与性质了解：凝胶的选择柱、样品、洗脱液的选择凝胶的保存一.概述层析Chromatography(色谱),利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异(溶解度、分子极性、分子大小、分子形状、吸附能力、分子亲合力等)，使各组分在支持物上集中分布在不同区域，借此将各组分分离。色谱历史古罗马人分析混合染料（类似辐射纸色谱）1903（1906）年，MichaelTswett提出色谱法1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素1941年，Martin

2、和Synge提出分配色谱法1944年，Martin等又提出纸色谱法1952年，Martin和James发明了气液色谱法1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现代色谱分析的建立1956年，Stahl系统研究了薄层色谱法(TLC)1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪，确定了核糖核酸的分子结构1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色谱(high-performanceliquidchromatography,HPLC)仪1975年，Small等提出离子色谱20世纪80年代，超临界色谱20世纪90年代，毛细管电泳（1809年Reŭss第一次电泳实验）

3、21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备色谱可望取得更大的发展层析法进行时有两个相，一个相称为固定相(Stationaryphase)，另一相称为流动相(Mobilephase)。由于各组分所受固定相的阻力和流动相的推力影响不同，各组分移动速度也各异，从而使各组分得到分离。二.层析技术的分类1.按两相所处的状态分类以液体作为流动相的层析称为液相层析，以气体作为流动相的称为气相层析。其固定相也可有两种状态，一种是以固体作为吸附剂的固定相，另一种是以涂布在固体载体表面的液体作为固定相。层析气相层析（gas-chromatography）液相层析（liquid-chromatograp

4、hy）气-固层析（gas-solidchromatography）气-液层析（gas-liquidchromatography）液-固层析（liquid-solidchromatography）液-液层析（liquid-liquidchromatography）2.按层析过程的机制可分为.吸附层析(adsorptionchromatography)----利用吸附剂对不同组分吸附能力的不同加以分离的方法。.分配层析(partitionchromatography)----利用不同组分在流动相和固定相中的分配系数不同而进行分离的方法。.离子交换层析（ion-exchangec

5、hromatography）----利用离子交换剂与各组分之间的离子亲和力不同而进行层析分离的方法。.凝胶层析（gelchromatography）----利用不同组分之间分子大小不同，在通过凝胶介质时所受到的阻滞作用的差异而进行分离的方法。.亲和层析（affinitychromatography）----利用生物大分子之间特有亲和力的不同进分离纯化的方法。3.按操作技术形式分类.柱层析（columchromatography）----将固定相装在层析柱中，使样品朝着一个方向移动，通过各组分随流动相流动而得到分离的方法。纸层析（paperchrmatography）---

6、-用纸作为液体的载体，样品点在纸上随后展开达到分离鉴定的方法。.薄层层析（thinlayperchromatography）----将适当的吸附剂在玻璃板或其他材料薄板上铺成薄层，样品点在上面随后用流动相展开达到分离鉴定的方法。三.层析的一般原理1.分配系数(Partitionchromatography)混合物在层析过程中不管层析技术采用哪两种状态的相(流动相和固定相)都能达到分配平衡，用来叙述一种物质在两种特定相中的分配程度是用分配系数表示的。分配系数----是一种物质在两种特定相中分配，在特定的温度时这个系数的值是一个常数，即:溶质在固定相中的浓度CsK=————————

7、————=——溶质在流动相中的浓度Cm有效分配系数：定义为化合物在一个相的总量除以另一个相中的总量。实际上是分配系数乘以两个相的体积比。在不同的层析机制中,分配系数K的含义不同,在吸附层析中,K为吸附平衡常数;在分配层析中,K为分配系数;在离子交换层析中K为交换常数.分配系数K值大,说明物质在层析中被固定相吸附得比较牢固,随流动相迁移的速度较慢,留在固定相中的时间较长,在洗脱液中后出峰。若分配系数K值小，则该物质在洗脱液中较早出峰。从一个混合物中分离和纯化一种生物物质的纯度如何，