董河－自体输血与少白细胞异体输血对肿瘤手术病人免疫功能的影响

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1、自体输血与少白细胞异体输血对肿瘤手术病人免疫功能的影响作者：董河指导：王世端教授前言1945年Mekawar就观察到输血可能改变受者的免疫状态，下调免疫功能。这种作用使肾移植存活率提高20%。1981年Gantt认为异体输血对肿瘤病人有负面影响:促进肿瘤生长、转移和复发。我们前期研究结果也证实：异体全血对免疫抑制严重。异体血中的白细胞可能是引起免疫抑制的原因之一。材料与方法1.仪器、试剂滤除白细胞血袋2U南京生物医学工程研究所流式细胞仪EPICS-XLCoulter-Beckman公司单克隆莹光抗体CD4-FITCCoulter-Beckman公司CD8-PECoulter-Beckma

2、n公司CD3-FITCCoulter-Beckman公司CD16+CD56-PECoulter-Beckman公司材料与方法2.病例选择30例胃或结肠癌病人，全麻下行肿瘤根治术。严格筛选：无放疗、化疗、免疫抑制剂的使用，无输血史等。两组病人的平衡：3.实验方法及步骤结肠癌或胃癌根治术ASAI-II级病人30例，男21例，女9例，年龄29-65岁；随机分为两组，每组15例病人；组Ⅰ为少白细胞异体输血组，组Ⅱ为急性等容血液稀释（ANH）自体输血组。材料与方法3.1麻醉方法两组病人均采用统一的麻醉药物和麻醉方法以排除麻醉技术的不同对免疫功能的影响。3.2ANH的方法套管针行桡动脉穿刺置管后与A

3、CD血袋相连，采血400ml，在采血的同时，经静脉输入同量的6%羟乙基淀粉，术中回输自体血。材料与方法3.3少白细胞异体血的制备与中心血站和输血科合作。3.4监测指标、标本采集(1）监测指标：CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、自然杀伤（NK）细胞。(2)标本采集：麻醉前、手术结束即刻、术后第1天和术后第5天。材料与方法3.5流式细胞术标本加荧光抗体、温育、溶血固定等后上流式细胞仪检测。4.统计学处理所有数据均以均数±标准差（X±S）表示。组内比较采用双因素方差分析，组间比较采用配对t检验。P<0.05为差异有显著性。结果表1两组病人CD3+T细胞（%）的变化（X±S，n=1

4、5）组别麻醉前手术结束术后1天术后5天组I70.2±13.164.0±15.557.9±16.5*72.7±10.7组II72.0±8.566.1±10.163.9±18.7*75.7±15.1*与术前比P<0.05图1两组病人CD3+T细胞（%）的变化（X±S，n=15）结果表2两组病人CD4+T细胞（%）的变化（X±S，n=15）组别麻醉前手术结束术后1天术后5天组I35.1±4.731.4±10.025.3±8.5*39.4±4.9组II38.5±6.133.3±7.528.2±4.2*43.4±3.8*与术前比，P<0.05图2两组病人CD4+T细胞（%）的变化（X±S，n=15

5、）结果表3两组病人CD8+T细胞（%）的变化（X±S，n=15）组别麻醉前手术结束术后1天术后5天组I35.5±15.130.0±8.029.0±8.4*32.0±10.5组II33.6±13.631.2±3.529.6±6.2*30.8±14.6*与术前比，P<0.05图3两组病人CD8+T细胞（%）的变化（X±S，n=15）结果表4两组病人NK细胞（%）的变化（X±S，n=15）组别麻醉前手术结束术后1天术后5天组I17.0±10.720.1±12.111.2±5.3*15.5±8.6组II15.3±9.518.8±12.49.7±4.7*13.1±5.6*与术前比，P<0.05图4

6、两组病人NK细胞（%）的变化（X±S，n=15）讨论1.免疫功能的监测指标1.1T淋巴细胞：在人体免疫系统中特别是细胞免疫中，承担着重要的功能。在机体抗感染、抗肿瘤及免疫损伤方面起着重要作用，主要亚群:CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞。讨论1.2自然杀伤（NK）细胞：是原始杀伤淋巴细胞，无抗原识别受体，无MHC限制性，不依赖抗体，能直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞。已证实NK细胞在防止肿瘤细胞扩散方面具有重要的作用。讨论2.流式细胞术(FCM)传统技术：采用固定标本，在荧光显微镜下肉眼观察。（主观性大）FCM技术：采用流动的单细胞悬液定量分析，同时借鉴激光技术，荧光显微镜技术

7、、单克隆抗体技术，计算机技术。讨论3.异体输血对免疫功能的影响异体血引起免疫抑制的机理还不十分清楚，一般认为与异体血中的白细胞及血浆成分有关。并可能通过主要组织相溶性复合体、T细胞及自然杀伤细胞数目、细胞因子、转化生长因子、等途径导致免疫抑制。所以祛除异体血中的白细胞是免疫保护的一条重要途径。讨论4自体输血(Autotransfusion)自体输血是指采集病人的血液或经过保存，以备围手术期使用。应用自体输血技术，可减少手术中的实际失