早生真菌粉棒束孢分子系统学研究

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1、扉页：独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：么墨煎垒蕴日期：兰全!§：五：生论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解

2、密后应遵循此规定)，t、，山研究生签名：4堇丞殛导师签名：日期：2夕／乡·莎·6．本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：——导师签名：日期：摘要摘要粉棒束孢Isariafarinosa(Holmskiold)Fries，又被称为虫花棒束孢，虫草棒束孢。粉棒束孢在生物防治、食品、医药和保健领域表现出巨大的潜在价值。然而，基础研究尚显薄弱，关于粉

3、棒束孢系统学研究，现有资料零散不充分，也不全面，甚至观点相悖，导致这一物种系统分类出现混淆和模糊，开发应用也出现混乱。本研究对粉棒束孢及相关种属进行分子系统学研究，主要获得以下结果：通过对6株粉棒束孢和l株蝙蝠蛾拟青霉菌株培养和显微形态观察，确定粉棒束孢形态结构具多型特征，主要体现为瓶梗形态和着生方式以及孢子连结方式。而粉棒束孢与蝙蝠蛾拟青霉二者形态显微结构存在重叠特征，不具有种特异性。本研究对采自滇中、滇西、滇东等地的粉棒束孢共29菌株进行ITS测序，在全29条，长502bp的ITS序列中，共10个变异位点，相互问没有显著性差异。

4、对GenBank中粉棒束孢ITS序列整理，共得到75条序列，其中6条长度仅300余bp，9条为错误鉴定；而另外60条与测序数据无差异。通过blast比对，还获得除上述60条以外与粉棒束孢高度相似36条序列，其中，18条标识为Paecilomycessp．或lsariasp．等未给定完整种名的序列，另18条标识为其他非粉棒束孢真菌，分别是3条蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyceshepiali、3条球孢白僵菌Beauveriabassiana、4条蛹虫草Cordycepsmilitaris、5条枚烟色棒束孢Isariafumosoros

5、ea、2条鲜红棒束孢Isariaamoenerosea和1条Akanthomycesnovoguineens括。经过序列特征分析，建议将这些序列全部视为粉棒束孢。对这125条进行聚类分析，获得4个分支，但遗传距离较小，分支间不具有明显的系统发育信息。通过对粉棒束孢及相关种属共计80个物种144条ITS序列进行分析，确定棒束孢属具有3个分支，相互间为多系类群。粉棒束孢与蝙蝠蛾拟青霉聚为一支，与其他棒束孢种被蚧霉菌、白僵菌、蛹虫草等隔开。同时，ITS区的RNA结构模拟表明ITS序列二级结构具保守性。对粉棒束孢等44物种共计63条序列进行

6、3．5基因(18SrDNA、28SrDNA、tef-la、rpbl和rpb2)系统学分析，结果发现棒束孢属物种形成3个分支，各类群的物种组成与ITS结果一致。粉棒束孢与蝙蝠蛾拟青霉无显著差异，聚为紧密一支，表明二者属于同一个系统学种。粉棒束孢与Cordycepstuberculata(无性型为云南大学硕士学位论文虫生真菌粉棒柬孢分子系统学研究Akanthomycesaculeatus)和Cordycepsconfragosa(无性型为Lecanicilliumattenuatum)遗传距离较小，但它们无性型属于3个不同的属，表明无性

7、型形态之间并不具有严格的系统发育关系。另外，多基因系统学支持将细束梗孢Akanthomyces和球束梗孢Gibellula分支纳入到狭义虫草属(CordycepsS．s．)中，但支持率较低。通过对350余条虫草类真菌18SrDNA分析，确定虫草类真菌18SrDNAI型内含子分布，为18SrRNA序列第560、1164、1210和1425位点。由此设计3对内含子特异性引物，实现虫草类真菌18SrDNAI型内含子定量检测。对5株粉棒束孢18SrDNAI型内含子进行测序，获得粉棒束孢18SrDNA位点1164和1425的I型内含子，内含子

8、序列分析显示在种间存在明显差异，但种内高度保守。因此，可以作为物种鉴定的辅助指标。利用8条RAPD引物对26株粉棒束孢和3株蝙蝠蛾拟青霉进行扩增，获得条带清晰的电泳谱带。谱带统计和聚类分析发现，在UPGAM聚类中距离为O．75处，供试