干细胞来源DC与CIK共培养抗K562A02及其干细胞的体外研究

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1、分类号：R55密级：学位类别：科学学位团专业学位口O学校代码：学号：学科门类：1O0622010602621医学又肄篑科矢垮T

2、矗NJINMEDICAL鞠NlV差RSlTY硕士学位论文MLASTER’SDISSERL蜘【'ION论文题目：干细胞来源DC与CIK共培养抗K562／A02及其干细胞的体外研究TITLECytotoxicityeffectofDCderivedfromstemcellsCO·culturewithCIKonK562／A02andtheirstemcells一级学科：临床医学二

3、级学科：内科学血液病学论文作者：梁芳芳指导教师：庞华教授导师组成员：司玉玲教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：粗日期洲3年阳化日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文

4、的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√’’)学位论文作者签名：导师签名：础r参／。日期：汐／≥年r月，咱日期：沙73够刖朋天津医科大学硕士学位论文中文摘要目前公认白血病耐药与复发的根本原因是由于患者体内残存有白血病干细胞(1eukemicstemcell，LSC)。一般传统的化

5、疗药物只能清除大部分白血病细胞，而对具有自我保护机制的LSC不敏感，使得我们当前使用的许多化疗药物不能从根本上治愈白血病，因此寻找针对LSC的治疗措施至关重要。近年来生物免疫治疗已成为研究热点，特别是有关DC和CIK联合针对各种肿瘤细胞的免疫治疗研究很多，已被众多学者认为是具有较大潜力的治疗措施。本实验的特色即在于通过干细胞来源DC与CIK联合对白血病细胞株干细胞进行杀伤，探讨其杀伤与凋亡机制，从而为研究针对LSC的治疗方法提供一定的实验基础。。目的证实慢性粒细胞白血病(CML)源干细胞能体外扩增诱导

6、生成树突细胞(DC)，且该DC具有CML干细胞的特征；分析DC、CIK共培养前后细胞免疫表型的变化；探讨其与相同CML来源的CIK共培养，对白血病耐药株K562／A02干细胞的杀伤及凋亡作用，从而为细胞免疫治疗清除LSC提供一定的理论基础和实验依据。方法用Ficoll淋巴细胞分离法提取BCR／ABL阳性表达的CML患者骨髓的单个核细胞(BMMC)，利用流式分选技术分离纯化CD34+CD38‘白血病干细胞(LSC)，利用细胞因子体外扩增诱导生成DC。取相同来源的CML骨髓提取单个核细胞诱导出CIK。DC

7、与CIK按1：10的比例共培养，通过流式细胞术(FCM)检测其对白血病耐药株K562／A02干细胞的凋亡及杀伤情况。光镜下观察DC、CIK细胞形态，电镜下观察DC超微结构，FCM分析DC和CIK共培养前后细胞免疫表型变化、K562／A02及DC的P．糖蛋白(P．gP)表达情况，荧光原位杂交(FISH)技术检测BCR／ABL融合基因在LSC及DC中的表达。结果1．白血病干细胞能成功诱导为成熟DC且该DC具有CML．LSC的特征LSC诱导后的DC可见大量伸展的树突状毛刺，为典型的树突细胞形态；电镜下观察具

8、备成熟DC的典型特征；DC的P．gp表达阳性率为51．8％左右，BCR／ABL融合基因阳性率为(48．87+18．44)％，因此DC具备CML．LSC的特征。2．DC共培养前后细胞免疫表型变化天津医科大学硕士学位论文共培养后DC免疫表型CD40、CD80、CD83、CD86及HLA．DR的表达率均高于共培养前；DC共培养前上述免疫表型的表达率分别是(41．08+2．35)％、(41．21+2．56)％、(32．28+3．19)％、(50．744-1．72)％、(49．654-2．29)％，共培养后升高

9、至(71．24+2．20)％、(62．42+3．03)％、(68．094-2．83)％、(71．28+2．66)％、(61．11+3．32)％，差异有统计学意义(氏0．01)。3．CIK共培养前后细胞免疫表型变化共培养后CIK的CD3CD8、CD3CD56免疫表型表达率均高于共培养前；共培养前分别是(46．65+3．91)％、(21．58±2．88)％，共培养后分别是(59．35+3．77)％、(37．50+4．46)％，差异有统计学意义(P