基于GapLCR和DNAzyme建立SNP的检测方法

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1、DNAzymebasedGap—LCRdetectionofSingle-NudeotidePolymorphismByLiZhouADissertationSubmittedtoGraduateUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofMasterofScienceChengduInstituteofBiologyChineseAcademyofSciencesMay,2013致谢YIIIl2I14

2、IIl3I11II1IIIoIl4IIY2431104本论文是在唐卓研究员的悉心指导和亲切关怀下完成的，值此论文完成之际，谨向我的导师唐卓研究员致以最衷心的感谢!感谢唐老师多年来对我的学习、工作上的悉心指导，对我生活上的关心和帮助。唐老师对科研工作的浓厚热情和执着精神、对学术研究孜孜不倦、一丝不苟的严谨态度，深深地感染着我。在我科研工作遇到问题的过程中，唐老师耐心的开导、循循善诱的启迪，对我最终顺利突破技术难关、完成实验研究起到了关键的作用，非常感谢唐老师的辛苦付出。感谢西南民族大学的廖戎老师，廖老师七年以来～直在我的学业、生活

3、上给予了我极大的关心和帮助。廖老师平和、豁达的人生态度和诲人不倦的教学精神深深地影响了我，使我无比感激并终身受盏，她将永远是我学习和生活上的榜样。在我学业的完成过程中，感谢成都生物研究所为我提供了这么好的学习与科研平台，感谢这里的老师，他们创造了良好的学术研究氛围，使我能够以一个平和的心态完成学业。感谢为我的科研工作提供了悉心指导，无私帮助的老师们，他们为我学业的JIL娇JJ完成提供了很大的帮助。感谢四川省人民医院的杨正林教授为我们提供的DNA样品，用于GJB2235delC位点的检测，为我课题的顺利完成提供了很多的便利!衷心祝

4、愿老师们健康、平安、幸福、快乐!感谢中国科学院成都生物研究所体外进化功能性生物大分子实验室的师兄、师姐、师弟和师妹们在我攻读硕士学位期间给我的帮助，感谢他们在实验和论文上的指点和帮助。在这个融洽、向上的氛围中，我度过了愉快、充实而又美好的三年时光。衷心祝愿大家今后一切顺利，取得更大的成绩!感谢默默支持我的家人，感谢父母，姐姐和弟弟，他们使我没有后顾之忧地安心学习，他们带给我温暖与宁静的内心，使我能够顺利地完成硕士阶段的学业。再次向所有关心和帮助我的人表示最诚挚的谢意!周丽2013年5月基于Gap-LCR和DNAzyme建立SNP

5、的检测方法II目录致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．I目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．III摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。VIIABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．Ⅸ第1章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1．1单核苷酸多态性概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1．1SNP的特点

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I1．1．2SNP的检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2I．I．3单核苷酸多态性的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．2DNA酶概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。101．2．IG一四聚体DNAzyme的结构及其分类多样性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。101．2．2．影响G．四聚体DNAzyme的结构的因素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．2．3G．四聚体DNAzyme的过氧化物酶活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．2．4G．四聚体过

7、氧化物酶活性的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151．3连接酶链式反应概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．3．1连接酶链式反应的建立与发展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯161．3．2连接酶链式反应的基本原理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．171．3．3连接酶链式反应产物的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，181．3．4连接酶链式反应的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19第2章基于DNAZYME和GAP．LCR建立SNP检测方法的可行性研究⋯⋯．212．1引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212．2主要试剂与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．2．1主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。232．2．2主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．242．