抗烟草花叶病毒天然产物筛选及其作用机制初步研究

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1、ScreeningofAnti-·TMVSubstanceandItsInhibitingMechanismonTMVADissertationSubmittedasFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterByZhenxingYangSupervisedbyZhongkaiZhangSchoolofLifeScienceYtmnanUniversityKunming650091ChinaMay2013独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地

2、方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：燃日期：2芝堡笙垄丝，矿论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名：—终址导师签名：种日本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI

3、系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：——导师签名：——日期：抗烟草花叶病毒天然产物筛选及其作用机制初步研究摘要植物病毒是危害农作物的一类重要病原，因其危害大、防治困难、素有“植物癌症”之称。近年来，国内外有关抗病毒天然产物的研究日益增多，从中筛选出有效成分已成为当前抗病毒新药研究的一个热点，但由于植物病毒对植物细胞的寄生性，病毒能够胁迫寄主细胞的生化机理，所以药物难以对病毒进行选择性攻击而不伤害宿主细胞，导致研究高选择性的化学抗病毒制剂面临极大的困难，至今仍未取得重大突破。本论

4、文以迄今烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，n爪，)为靶标病毒，首先用先施用化合物再接种病毒及化合物和病毒混合接种两种处理方式，在心叶烟上通过半叶枯斑法筛选有活性的抗病毒化合物。发现化合物A1、A3、A4、D4、D6在两种处理方式下均对抑制病毒有较好活性，抑制率在35％．55％之间；而化合物A2、C1、C2、D2在先施用化合物再接种病毒处理方式下对抑制病毒有较好活性；化合物B1、B2、B3、B5、C3、C4、C5、D1、D5在混合接种处理方式下对抑制病毒有较好活性。为了进一步明确化合物对病毒外壳表达的影响，在TMV专性寄主普通烟K326上对活性化合

5、物进行抑制TMV的研究。首先进行叶圆片试验，结果表明在半叶枯斑法中抑制病毒有较好活性的化合物A1、A3、A4，其抑制病毒在体内增殖的活性有所下降，化合物B1、B5、B3对抑制病毒体内增殖活性降幅较大，说明这些化合物对病毒的作用机理可能是和病毒混合后使病毒钝化失去活性。最后在活体植株上用化合物A1、A3进行抗TMV增殖试验，Westernblot检测表明两种化合物均能抑制TMV外壳蛋白在植物体内的表达，且和化合物浓度显现相关性。本文还对TMV在寄主植物体内复制周期进行了初步的研究，发现在接种TMV的叶片中病毒在2．5天之间大量复制；对于未接种TMV的新叶，在处理后的

6、3-6天之间病毒大量复制。同时用AHO(3．丙酮基．3．羟基羟吲哚)，跟抗病毒药剂宁南霉素、几丁聚糖进行了抗病毒活性对比试验，水处理作对照，发现3天后AHO处理组植株中病毒增殖较慢，5天后有所上升但也比另两个处理组低。关键词：烟草花叶病毒；普通烟；抗病毒化合物；抑制率抗烟草花叶病毒天然产物筛选及其作用机制初步研究AbstractPlantvirusesareimportantpathogensofmanycrops．Theyarecalled”plantcancer”becauseofseriousdamagescausedanddi伍cultiesofpreve

7、ntion．Inrecentyears．studiesofanti-viralnaturalproductsareincreased，andscreeninge伍cacious．compoundforanti-virusdrugsbecomeahottopic．However,duetothedependenceofvirustohostplantcellsandthestresscausedbyviruseson也ebiochemicalmechanismof也ehostcells．itisverydi伍culttoinhibitorvirusselective

8、lywit