王惠敏-药包材微生物检验

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1、药包材微生物检验安徽省食品药品检验研究院器械包材所王惠敏微生物的基本知识回顾微生物:存在于自然界中的一群体型细小、结构简单、肉眼看不见，必须借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物。按其结构、化学组成及生活习性可分为:原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善，如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体。真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整，如真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物、藻类。非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器，如病毒和朊病毒等。按其致病性可分为:病原性微生物非病原性微生

2、物微生物的特点个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。分布广,种类多（10万多种）：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等,土壤中的数量最多。代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍。生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代。适应性强，易变异（耐药性产生的原因）。葡萄球菌酵母菌（芽痕）棒状杆菌大肠杆菌弧状菌链球菌菌落单位菌落单位---CFU:由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉眼可见的

3、菌落，每个菌落就是1CFU细菌菌落霉菌菌落包材的微生物污染包材微生物污染：微生物的产生、附着而给包材及生产环境带来不良影响。污染包材的细菌：常见污染包材的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。包材的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、生产用原辅料、包装材料、生产操作人员等微生物检验一、实验准备二、培养基的制备三、人流、物流程序四、检验步骤方法五、培养观察与结果判断洁净室的启用微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内

4、进行。在检验开始前，应确保：a.洁净室房间、台面等已清洁消毒b.洁净室已臭氧灭菌不少于半小时c.洁净室净化空调系统持续运转不少于1小时，紫外灯已开启d.洁净室中有压差要求的房间压差达到规定实验准备实验器材、消耗品的准备a.无菌衣、手套、口罩、试管、瓶子、培养皿、消毒剂配制缸、脱脂棉花球b.一次性薄膜过滤滤器、微生物检查薄膜过滤仪c.消毒剂、酒精灯培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。培养基的制备是检验的重要一环。培养基的制备培养基制备过程中的注意事项培养基的水化培养基水化使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿如三

5、角烧瓶。蒸馏水洗净，烘干后方可使用。不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长；配制培养基最常用的溶剂是纯化水,不能含有任何可能抑制或影响微生物生长的物质；培养基的溶解在培养基分装灭菌前,应溶解均匀,使用电炉等设备煮沸培养基时,应用小火加热,并边加热边搅拌,避免培养基焦化或爆沸溢出。培养基的灭菌已配制好的培养基必须立即灭菌湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间（121度，15-30分钟，20分钟）培养基制备过程中的注意事项培养基的保温培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在高压灭菌器中，避免造成过度灭菌,影响培养

6、基的营养成分或选择性效果。建议用45℃—55℃水浴锅保温不得超过8小时（60℃的培养箱，温度不同，长时间高温影响培养基质量）。培养基的贮藏配制好的培养基应保存在避光的环境。一般在三周内使用（琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性）。固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次，不得再灭菌。人流、物流程序物流将样品、灭菌后的物品、集菌过滤器等转移入传递窗内，打开传递窗内的紫外灯，照射不少于0.5小时。人流检验人员在物品紫外消毒即将结束时，开始进入洁净室。在更衣室脱去外衣和鞋。清

7、洗双手后，在物品柜内取口罩和手套，戴上口罩。打开灭菌后的无菌衣外包装，取出无菌衣，穿戴整齐，要求严格覆盖头发、胡须和颈部。打开手套外包装，取出手套戴上，无菌衣袖口应包裹在手套内。用更衣室内的消毒剂浸泡双手后，自然挥干。进入缓冲走廊，关闭传递窗内的紫外灯后，打开传递窗的门，取出样品和其他实验物品，经二级缓冲，进入操作间。开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精喷洒擦拭消毒工作台面。检验步骤方法检验方法：平皿法、薄膜过滤法药品检验三种方法，包材检验两种方法的选用仅与最后结果的报告有关,不影响检测的准确性。以铝箔

8、为例，若无菌生长，薄膜法结果为＜1cfu/100cm2，平皿法结果为＜30cfu/100cm2。薄膜法费时费力，但目前标准要求。药典要求：采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um，直径一般为50mm。经过多次反复实验，发现采用75mm滤膜，菌落计数更方便、清晰。检验过程（以常用的薄膜过滤法为例）75MM滤器５０MM、75MM薄