微生物操作规程

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1、第一部分微生物检验的准备工作1.1微生物化验室的注意事项1.1.1化验室的清洁1.1.2无菌室的要求1.1.3操作前的准备工作1.2微生物检验玻璃器皿的清洗1.3微生物检验器皿的包扎1.4消毒和灭菌1.4.1化学灭菌法1.4.2物理灭菌法1.4.2.1干热灭菌1.4.2.2高压蒸气灭菌1.4.2.3间歇灭菌1.4.2.5紫外杀菌第二部分取样方法2.1无菌取样的一般方法2.2容器取样2.3酵母泥的取样2.4表面取样2.5空气及气体取样2.5.1空间空气取样2.5.2压缩气体取样2.6固体物质取样2.6.1颗粒状物质2.6.2粉状物质2.7洗净瓶和听的取样第三部分培养基3.1培养基的定

2、义3.2培养基的分类3.3培养基的制作3.4培养基的检定3.5培养基的储存3.6NBB培养基第四部分实验室检测方法4.1LH系列层流洁净工作台操作规程4.2样品的稀释4.3膜过滤法4.3.1试验室膜过滤法4.3.2过滤膜的培养4.4平皿培养4.4.1混合平皿培养4.4.2平皿涂布培养4.5.1好氧培养4.5.2厌氧培养4.6显微镜检查4.7细菌革兰氏染色鉴别法4.8过氧化氢酶试验第五部分各种菌类的检测方法5.1一般好氧性微生物的测定5.1.1细菌总数的测定（培养皿法）5.1.2细菌总数的测定（膜滤法）5.1.3酵母中一般好氧性菌的测定5.2酵母数的测定5.3厌氧菌总数的测定5.3.

3、1厌氧菌总数的测定（培养皿法）5.3.2厌氧菌总数的测定（膜滤法）5.3.3乳杆菌属、片球菌属、梳状菌属和巨球菌属的检测5.4大肠菌群的测定第一部分微生物检验的准备工作1.1微生物化验室的注意事项1.1.1化验室的清洁(1)、在化验室操作时，必须穿工作服、帽子，无菌操作要求严格，操作应在无菌室里进行。(2)、所有的培养物，被污染的玻璃器皿及阳性的检验标本，应放入消毒水中浸泡消毒，再用高压蒸气灭菌或用水煮沸后再清洗。(3)、工作完毕，双手应用肥皂和水洗净。1.1.2无菌室的要求(1)、无菌室应分为无菌操作间和缓冲间，缓冲间要比无菌操作间大一些。(2)、无菌室的高度应在2.2—2.5米

4、为好。(3)、缓冲间、无菌操作间的门，不能互相对着，应错开，而且是侧拉门。(4)、缓冲间、无菌间以及操作台内各安装30瓦的紫外灯一支，10—15每平方米安装30瓦的紫外灯管1支为宜。紫外灯安装在离操作台面1.0—1.5米高度处为宜。(5)、无菌室的室温应控制在18—25oC，相对湿度为40—60%为宜。1.1.3操作前的准备工作：(1)、无菌室应定期用紫外灯进行杀菌，室内每天用紫外灯灭菌20--30分钟，地面应保持清洁，无卫生死角。(2)、无菌操作必须在超级净化工作台里进行，在使用超级净化工作台前先开紫外灯照射30分钟，然后关掉紫外灯，待30分钟后开照明灯及无菌风。(3)、经常对无

5、菌室进行无菌程度的检查。(4)、操作前先将待检样品用75%的酒精消毒后放入无菌操作台。(5)、进入无菌室前，应先做好个人卫生工作，换上工作鞋，穿工作服，带帽。工作服、工作鞋、帽、口罩只准在无菌室内专用，不准穿着到其它地方去，并定期进行洗换，每天进行消毒灭菌。(6)、无菌操作前，双手及在操作台内手臂部分用75%的酒精擦拭消毒。1.2微生物检验玻璃器皿的清洗1、目的玻璃器皿初步处理。2、所用器具及试剂(1)、毛刷(2)、餐洗净(3)、5%碱液(4)、2%盐酸(5)、洗液（重铬酸钾—硫酸液）(6)、自来水3、操作方法(1)、一般玻璃器皿:一般的玻璃器皿(如培养皿、试管、三角瓶等)可用毛刷

6、及洗涤剂去灰尘、油垢，无机盐类等物质，然后用自来水冲洗干净。以水在内壁均匀分成一薄层而不出现水珠时为油垢除尽的标准，洗刷干净的玻璃器皿晾干后备用。(2)、污染过的玻璃器皿：污染过的平皿用水冲洗后放在5％的碱液里煮沸数分钟后，再用自来水冲洗干净，凉干备用。(3)、不易洗刷干净的玻璃器皿的洗涤先用水初步冲洗后，把水空净，浸泡在洗液里过夜，控净洗液后用自来水冲洗数次，再用蒸馏水涮一下，晾干备用。(4)、新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用自来水洗净。以水在内壁均匀分成一薄层而不出现水珠时为油垢除尽的标准，洗刷干净的玻璃器皿晾干后备用。1.3微生物检验器皿的包扎1、目的杀菌前的准备工作2、

7、所用器具(1)、棉花(2)、橡胶塞(3)、牛皮纸或报纸(4)、棉绳3、操作方法(1)、试管：塞上棉塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做乳糖胆盐培养基时，将试管头塞上专用塑料塞放入铁丝框。(2)、吸移液管：将吸移液管一头塞上棉塞，然后单支或几只用纸包起来，或用盒装。(3)、三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口用棉塞塞好，或塞上橡胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。(4)、玻璃洗瓶：将玻璃洗瓶瓶口用棉塞或橡胶塞塞好，用牛皮纸把塞头部包起来。(5)、磁性漏斗：用牛皮纸或