生物技术试验讲义

《生物技术试验讲义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物工程专业实验讲义(适用于生物工程专业)曹飞制药与生命科学学院二零零九年四月目录实验一发酵种子的制备…………………………1实验二E.coli和Pseudomonasdacunhae2014发酵培养………2实验三高速冷冻离心机的使用方法……………….3实验四固定化生物催化剂的制备…………………4实验五游离细胞与固定化细胞酶活比较…………………5实验六固定化生物催化剂的连续生产………………6实验七　Ｌ－Asp的分离…………………………………7实验八Ｌ－Asp脱羧反应制备L-Ala……………………6实验九离子交换树脂分离L-Ala…………………8一、实验原理与实验流程实验原

2、理：实验流程：清洗发酵罐培养基配制灭菌接种微生物发酵离心湿菌体卡拉胶固定化细胞富马酸溶液配制转化脱色等电点结晶过程检测（菌体浓度、形态、pH）固定化细胞与游离细胞酶活测定标准曲线绘制干燥L－天冬氨酸培养基配制灭菌接种微生物发酵转化离心脱色离交分离L-丙氨酸浓缩重结晶L－丙氨酸PS20147纸层析检测反应进程过程检测（菌体浓度、形态、pH）离子交换树脂预处理实验一发酵种子的制备一、目的要求了解实验室种子制备过程。二、原理种子制备过程包括琼脂斜面、固体培养基扩大培养、摇瓶液体培养和种子罐培养等多级扩大培养。在实验室里，一般只进行到摇瓶液体培养获得发酵用种子。不同菌种其具体制

3、备方法不同，下图是菌种子制备过程示意图。斜面沙土管冷干管液氮管实验室种子制备生产现场种子制备生产种子制备的一般流程菌种保藏二级斜面一级斜面米孢子母瓶子瓶一级种子罐发酵罐二级种子罐三级种子罐三、试验及器材1．菌种：斜面低温保藏的大肠杆菌（E.coli）和Pseudomonasdacunhae201472．培养基：E.coli种子培养基：牛肉膏0.5%、NaCl0.5%、蛋白胨1%、pH7.6~7.8P.dacunhae20147种子培养基：15g/L谷氨酸钠、蛋白胨8g/L、玉米浆5.5g/L,KH2PO40.5g/L,MgSO40.1g/L。3．器材：天平、灭菌锅、试管

4、、三角瓶（500mL）四、操作方法1．按种子培养基配方分别配制1000mL液体培养基，分装于三角瓶中，每瓶100mL，压力1Kg/cm2灭菌30mins，结束后取出。2．挑一环斜面低温保藏的E.coli和P.dacunhae20147接于各自的种子培养基中，37℃培养24hs，转速约150rpm。3．种子瓶摇好后，及时接种到发酵罐。也可以在冰箱中短时间保藏。五、思考与讨论1.实验室种子制备的原则是什么？2.哪些参数对于实验室种子制备产生影响？实验二E.coli和Pseudomonasdacunhae2014发酵培养一、目的要求1．了解发酵罐的结构，掌握发酵罐的基本操作技

5、术。2．了解发酵罐中微生物生长的生长特征。3．掌握实验室中微生物从斜面→摇瓶→发酵罐的无菌操作培养技术，对工业化微生物生产过程作出初步了解。4．掌握酶合成代谢调控机制。5．掌握发酵工艺控制工艺。二、原理一定数量的微生物，接种于合适的新鲜培养基中，在适宜的培养条件下，所表现出的群体生长特征可分为四个时期，即延迟期、对数期、稳定期和衰亡期。微生物在各个时期的生理特征各不相同。微生物的生长过程是其总的代谢活动的综合体现，每一种代谢途径均由一些特有的酶的反应组成，同时微生物代谢具有高度的调节作用，通过本实验了解酶合成的调节机制之一―――酶合成的诱导。三、试剂及器材1．菌种：实验

6、一液体培养24h的E.coli和P.dacunhae20147的实验室种子2．发酵培养基：E.coli发酵培养基:玉米浆4%、富马酸1%、K2HPO40.5%、MgSO40.25%、NaCl0.1%（用氨水溶解富马酸后再加入玉米浆和其他成分，用稀盐酸调节pH为7.5），消泡剂1-2mL，pH7.5。P.dacunhae20147发酵培养基：20g/L谷氨酸钠、蛋白胨10g/L、玉米浆20g/L,KH2PO40.5g/L,MgSO40.1g/L、消泡剂1-2mL，用氨水调pH至7.0-7.2。121℃，灭菌20min。通气，冷却至37℃（E.coli）或30℃（P.dac

7、unhae20147）。4．器材：发酵罐、灭菌锅、721分光光度计、超净工作台、台式高速离心机、离心管、移液管。四、操作方法1．按配方先后配制1000mL发酵培养基，调pH7.5，装入发酵罐中，包扎好各个进气口、出气口和取样口，保持121℃下灭菌30mins，结束后取出放在发酵罐台上冷却。2．待发酵点中的培养基冷却至37℃（E.coli）或30℃（P.dacunhae20147）左右时，用火环接种法将E.coli和P.dacunhae20147种子液接发酵罐中，接种量10~15%，控制温度37℃或30℃，转速约为300rpm，空气流速1L