过继转输的胚胎抗原耐受T细胞在宿主孕鼠体内的效应机制

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1、。{-文摘嘤过继转输的胚胎抗原耐受T细胞在宿主孕鼠体内的效应机制中文摘要正常生理妊娠类似于同种异体移植，作为同种移植物的胚胎在母体内存活直至分娩，实际上反映母体对胚胎的免疫耐受。而妊娠失败多因母体对胚胎的免疫排斥所致。研究母一胎免疫耐受机制，不仅对动物及人类自然流产的防治具有重要意义，而且对移植免疫和肿瘤免疫的研究亦产生深远的影响。协同刺激分子CD80／CD86与其配体结合所产生的协同刺激信号在T细胞活化、增殖、辅助性T细胞(Th)分化及效应性细胞因子分泌中起重要作用。在T细胞激活过程中，当TCR识别MHC一抗原肽启动第一信号后，如果缺少

2、协同刺激信号，则可诱导T细胞产生抗原特异性无反应(Anergy)，而诱导T细胞产生克隆无反应被认为是造成抗原特异性免疫耐受的重要机制。因此，干扰协同刺激信号是目前诱导抗原特异性免疫耐受和调控Th细胞分化的重要手段。本文应用抗CD80和CD86单克隆抗体在体内阻断B7一CD28／CTLA一4协同刺激途经而诱导自然流产模型CBA／JXDBA／2孕鼠母一胎免疫耐受，再将耐受孕鼠的T细胞过继转输至同系自然流产孕鼠，以研究过继转输胚胎抗原耐受T细胞对小鼠自然流产模型妊娠预后的影响及其机制。第一部分孕早期干预协同刺激信号诱导自然流产模型孕鼠母一胎免疫

3、耐受目的探讨干预协同刺激信号CD80和CD86对小鼠自然流产模型妊娠预后及孕鼠免疫细胞对父系抗原免疫耐受状态的影响。方法以正常妊娠模型早CBA／JX6BALB／c为对照组，自然流产模型早CBA／J×6DBA／2为研究组，各组CBA／j孕鼠均于孕4天(着床期)分别腹腔注射大鼠1中文摘蛭抗小鼠CDSO和CD86单克隆抗体(mAb)或大鼠同型igG。于孕9灭采件j单向混合淋巴细胞反应分析孕鼠脾刖．免疫细胞对父系抗原的增殖能力，并测定上清液II．一2分泌水平，以研究孕鼠母胎免疫耐受状态。孕14天比较两种模型各组孕鼠胍胎吸收率的变化。结果在『F常妊

4、娠模型中，腹腔注射大鼠IgG的CBA／J孕鼠的胚胎吸收率为8，72％，腹腔注射大鼠抗小鼠CD80／CD86单克隆抗体的CBA／J孕鼠的胚胎吸收率为7．69％，两组比较无显著性差异(P>O．05)；与腹腔注射大鼠19G的孕鼠相比，腹腔注射大鼠抗小鼠CD80／C1)86单克隆抗体的孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原增殖反应及上清液IL2分泌水平均无显著性差异(P>O．05)。在自然流产模型中，腹腔注射大鼠IgG的CBA／J孕鼠的胚胎吸收率为24．32％，而腹腔注射大鼠抗小鼠CD80／CD86单克隆抗体的CBA／J孕鼠的胚胎吸收率下降至9．76％，与注

5、射大鼠IgG组比较有显著性差异(PO．05)；另外，与腹腔注射大鼠IgG组比较，应用大鼠抗小鼠CD80／CD86单克隆抗体使自然流产孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及IL一2分泌水平均显著下降(P

6、耐受T细胞对自然流产模型孕鼠妊娠预后的影响；分析宿主孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的免疫耐受状态及母一胎界面Thl／Th2细胞因子表达水平，并观察过继转输的胚胎抗原耐受T细胞在宿主孕鼠体内的归巢和分布，以研究胚胎抗原耐受T细胞对妊娠预后作用的分子机制。方法于孕4天给自然流产模型孕鼠分别腹腔注射大鼠同型IgG或大鼠抗小中文摘要鼠CD80和CD86单克隆抗体，币常妊娠模型孕鼠孕4天没有腹腔注射。于孕9天，应用免疫磁珠阴性分选三组孕鼠脾脏的T细胞和B细胞，并用CFSE体外荧光标记，将标记的T、B细胞分别过继转输至孕4天的遗传背景午H同的同系自然流产

7、模型CBA／J孕鼠，36小时后应用双光子共聚焦显微镜观察T、B细胞在宿主孕鼠体内脾脏、子宫引流淋巴结及母胎界面组织巾的分布；采用单向混合淋巴细胞反应分析孕9天宿主孕鼠脾脏免疫细胞在父系抗原刺激下的增殖能力；并用ELISA测定孕14天宿主母一胎界面组织体外培养上清液中Thl型／Th2型细胞因子(IL4、IL10、TNF—Q、IFN—Y)分泌水平：并比较各组宿主孕鼠的胚胎吸收率。结果与无转输任何细胞的自然流产模型孕鼠相比，过继转输胚胎抗原耐受T细胞和转输正常妊娠模型孕鼠T细胞均使宿主孕鼠母一胎界面IL4和IL一10的表达显著增加(P

8、)，IFN—Y和TNF—Ot的表达则显著下降(P