油菜叶际微生物多样性及其对敌敌畏的降解

油菜叶际微生物多样性及其对敌敌畏的降解

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1、摘要摘要植物的叶际存在多种类型的微生物,包括不同种类的细菌、丝状真菌、酵母和藻类。这些叶际微生物是植物生态系统中的重要组成部分,发挥着重要的生态功能。伴随着各种农药广泛应用于控制植物的病虫害,其残留问题越来越受到关注,农药残留的生物降解越来越受到重视。关于叶际微生物的多样性及其对农药残留的降解作用鲜见报道。本文采用传统的微生物分离培养方法调查了油菜叶际可培养微生物的多样性,并检测了这些微生物对敌敌畏的降解能力,采用分子生物学方法对细菌进行了初步鉴定和系统发育分析。获得主要结果如下:1)从稀释平板法计数结果表明,油菜的叶际上存在着大量的微生物,牛肉膏蛋

2、白胨培养基上为5.3×105CFU·g-1鲜叶片、马丁氏培养基上为2.9×103CFU·g。1鲜叶片,和改良高氏I号上的为5.9×i04CFU·g一鲜叶片。在三种培养基上细菌总数分别为5.2×105CFU·g‘1鲜叶片和8.7x102CFU·gd鲜叶片和3.8×104CFU·g。鲜叶片,占微生物总量的94%。2)从三种培养基上分离出细菌60株,真菌54株,并对细菌16SrDNA序列进行了分析。16SrDNA序列分析表明,油菜叶际具有较为丰富的可培养细菌种群,最终分离获得36株茵落形态各异的细菌。主要包括厚壁菌f"](Firmicutes,16株)、变

3、形菌门(Proteobacteria,14株)、放线菌门(Actinobaeteria,4株)和拟杆菌门/绿菌门(Bacteroidetes/Chlorobigroup,2株);其中,芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌属,占菌株总数的35%。3)从油菜叶面上筛选得到2株能够高效降解敌敌畏的细菌,命名为N20和N2。这些菌经16SrDNA序列分析和系统发育分析,鉴定为Bacilluscereus和Janibactersp.,在牛肉膏蛋白胨培养基中,对敌敌畏的降解率24h内可达80%以上。4)研究了一株从土壤中分离、筛选的类球红细菌(编号为EBL07

4、06)在水溶液中降解敌敌畏的特性,在pH6.9~7.5、温度20一50℃条件下,在5x10嚣CFU·mL以的类球红细菌稀释液中,400mg·L。1的敌敌畏在12h内降解率达到98%以上,其降解敌敌畏的机理主要是矿化作用。关键词微生物多样性;叶际微生物;微生物降解:敌敌畏;油菜河北科技大学硕士学位论文AbstractTheindigenousmicrobialcommunitiesthatresidewithintheplantphyllospherearehighlydiverseandincludemanydifferentspeciesofbac

5、teria,filamentousfungi,yeastandalgae.Thesephyllospheremicrobeswhichoftenplayimportantecologicalrolesareallimportantcompositionofplantecologicalsystem.Differentchemicalpesticideandbiopestieidearenowwidelyusedtocontrolpestsandplantdiseases.Howevertheresiduesofpesticideshavebecome

6、thekeyproblemesforfoodsafety.ButtherewerefewreportsOilthepesticidesdegradationbyphyllospheremicrobes.Inthepresentstudy,weuseculture-dependentmethodtoinvestigatethemicrobialdiversityofrapephyllosphere.Moreover,thecapacityofdegradingpesticidedichlorvos(DDVP)bythephylospheremicrob

7、eswastested.TheresultsareaSfollows:1)ThreekindsofculturemediawereusedtOisolatemicroorganisms.5.3×105,2.9×103and5.9X104CFU·岔1freshleavesofstrainswerecalculatedonLBbrothagar,MartinagarmediumandGauseIagarmediumrespectively.Bacteriawerethepredominantspeciesinthetotalisolatedmicrobi

8、alstrainsandaccountedfor94%.2)60strainsofbacteriaand54

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