水稻TFL2基因的克隆与转化

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1、广西大学硕士学位论文水稻TFL2基因的克隆与转化姓名：邓平壤申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：关和新20090630水稻TFL2基因的克隆与转化摘要花发育的分子遗传学研究是90年代以来植物发育分子生物学的一个研究热点。近年来，随着对双子叶植物花发育机制研究的深入，双子叶植物花的诱导、形成以及花器官分化的分子遗传学机制己创立。但是，对单子叶植物花发育过程的分子机制研究还不深入，因此对单子叶植物水稻花器官发育的研究，对植物发育生物学与分子生物学的发展有着重要的意义。TFL2是一成花基因。在双子叶模

2、式植物拟南芥中，TFL2主要表达在维管束及植株分生组织，延迟开花时间，突变体tile主要表现为早花和顶端花。TFL2基因表达产物是HPl(heterochromatinprotein1)的同系物——LHPl。若能清楚了解TFL2基因在其他植物的表达情况，将具有重要的现实意义。本研究以水稻作材料，利用PCR扩增技术从水稻栽培品种农垦58N中克隆到TFL2基因目的片段，构建TFL2基因超量表达及RNA干扰载体，并利用基因转导技术，获得转基因植株，以期通过对转基因水稻的细胞学和表型分析来研究TFL2基因的表达调

3、控和功能。首先，我们将扩增到的35SPromoter、Noster、TFL2RNAinterference(TFL2RNAi)目的片段、TFL2超量表达(TFL2overexpression)目的片段克隆到相应的中间载体176#和pUCl8中间载体中，命名为176#．TFL2RNAi以及pUCl8．乃琵2overexpression，以便于DNA钡I]序和双酶切。进而将双酶切的目的片段分别转入植物表达载体pCAMBIAl301中，构建成相应的植物表达载体pCAMBIAl301一TFL2RNAi和pCAMB

4、IAl301．TFL2overexpression。采用预培养2天的粳稻品种农垦58N的成熟胚愈伤组织作为转化受体材料，将构建好的重组质粒与含有潮霉素基因的5群质粒混合，基因枪轰击后，26。C暗培养48小时，转入筛选培养基进行筛选。经过3代(2周／代)时间筛选，获得抗性愈伤组织，将生长旺盛的愈伤转入分化培养基培养，数周后获得再生转基因植株。目前，已获得PCR检测过的9株阳性转基因苗，其中TFL2RNAi有4株，剩余5株为TFL2overexpression阳性转基因苗。由于转基因植株还处于苗期，目前只是用

5、PCR扩增方法检测了转基因植株的阳性率，其表型变化不大，现在还无法观察到生殖发育时期，特别是枝梗分化到开花这段时期的表型性状，因此还必须等待和观察转基因水稻后期的生长，才能进一步验证该基因的功能。关键词：TFL2基因；克隆；转化；转基因；水稻ⅡCloneandTransformationofm2GeneinRiceDengPingrang(CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity,Nanning530004，China)ABSTRACTThestudiesonmolec

6、ulargeneticsofflowerdevelopmenthavebecomeahotspotinthefieldofmolecularbiologyofplantdevelopmentsince1990’S．Recently,followingthefurtherresearchonthedicotflowerdevelepment，themoleculargeneticmechanismrelatedtofloralinduction，formation，differentiationhasbee

7、nestablished．However,themoleculardevelopmentalstudiesareincompleteonmonocot，SOtheacquisitionandresearchonthericefloralreproductivemechanismhaveimportantsignificance．TEMINALFLOWER2(TFL2)isafloralgenewhichcalldelayfloweringtimeandexpressesmainlyinthemeriste

8、mandvascularofArabidopsis，adicotyledonmodel，Whilethetilemutantcanresultinearlyfloweringandapicalflower．AndLHP1，theproductionofTFL2isahomologueofheterochromatinprotein1(HP1)，SoitwillbeverysignificantifweCanclearlyund