凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的优化

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1、2015年第36卷第20期总第497期SILIAOGONGYE凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的优化122111，21■郑玉忠刘亚群刘昂杨培奎查广才庄东红张振霞(1.韩山师范学院生物系，广东潮州521041；2.汕头大学广东省海洋生物技术重点实验室，广东汕头515063）摘要：试验目的是为研究优化凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞的培养体系。试验基于MTT法，分析不同培养条件（包括培养基类型、pH值、渗透压、FBS添加量等因素）对凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的影响。结果表明：在pH值为7.6，NaCl添加量为1.2%，FBS添加量为5%的2×L-15培养基中，凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞生长状况

2、最好。因此，通过改变培养条件，可以适当优化凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞的培养体系，但未能获得良好的传代细胞。关键词：凡纳滨对虾；肝胰脏；原代细胞；培养基;pH值；渗透压；FBSdoi:10.13302/j.cnki.fi.2015.20.010中图分类号：S816.32文献标识码：A文章编号：1001-991X（2015）20-0047-04OptimizationofculturesystemaboutPenaeusvannameihepatopancreasprimarycellZhengYuzhong,LiuYaqun,LiuAng,YangPeikui,ZhaGuangcai,Zh

3、uangDonghong,ZhangZhenxiaAbstract：TheaimofthetrialwastooptimizetheculturesystemoftheprimarycellfromPenaeusvan⁃nameihepatopancreas.BasedontheMTTmethod,differentconditions(includingmediumtypes,pH,osmoticpressureandFBSamount)toculturePenaeusvannameihepatopancreasprimarycellwerede⁃termined.Theoptimu

4、mcultureconditionsofhepatopancreasprimarycellwasasfollows:2×L-15medi⁃umpH(7.6)supplementedwith5%(v/v)FBS,1.2%NaCl(w/v).Byalteringthecultureconditions,theprimaryculturesystemofLitopenaeusvannameihepatopancreaticcellshadbeenproperlyoptimized,butstablecelllinesfailedtobeobtained.Keywords：Penaeusvan

5、namei；hepatopancreas；primarycell；medium；pH；osmolality；FBS凡纳滨对虾（Penaeusvannamei），亦称南美白对生抗药性，甚至产生新型病害，进而导致对虾遭受更虾，是国际公认高养殖、高产量的三大优良虾种（凡纳严重的病害或种质衰退。同时，抗生素在对虾体内的滨对虾、斑节对虾和中国对虾）之一。凡纳滨对虾抗残留又会造成食品安全问题，影响人的健康。病力强、耐盐性广、适应能力强、生长快、产肉率高，是对虾原代细胞培养是研究对虾病害的致病机理、世界水产市场的热销品种，1988年引入我国后迅速掀诊断和防控技术的重要手段。肝胰脏恰恰是对虾最起养殖热

6、潮，目前的凡纳滨对虾产量占全国对虾产量为关键和核心的器官，参与消化、吸收、储存、代谢等的80%以上。重要生理活动，特别在启动对虾免疫反应中起重要随着凡纳滨对虾养殖规模的迅速扩张，高密度的作用。如能建立肝胰脏细胞培养条件，培养能够继代养殖、种质的退化和环境污染的加剧等不利因素诱发的肝胰脏原代细胞，将有利于构建对虾病害研究和药了大规模的病害；因此，抗生素等药物被普遍用在对物筛选体系。尽管国内外不少专家学者在对虾细胞虾病害的防治中。但是抗生素的滥用，导致病原物产的体外培养上进行了大量的探索和研究，但目前对虾的细胞培养仍然处于原代培养水平，永生性的细胞性一直未建立。因此，本研究拟用改进的对虾细

7、胞培养作者简介:郑玉忠，博士，研究方向为中药学。技术，对凡纳滨对虾肝胰脏细胞进行优化，提高肝胰通讯作者：张振霞，博士。脏细胞存活率，建立和完善成熟高效的对虾原代细胞收稿日期：2015-08-17培养体系，然后进一步建立对虾永生性细胞系。基金项目：广东省科技计划项目[2012B050300025]；广东1仪器与材料省海洋生物技术重点实验室开放基金项目[GPKLMB201201]1.1仪器47试验研究2015年第36卷第20期总第497期pH计(梅