碱水解-高效液相色谱法测定草鱼组织中喹乙醇代谢物的残留

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1、2012年3月中国渔业质量与标准Mar．2012第2卷第1期ChineseFisheryQualityandStandardsV01．2No．1碱水解一高效液相色谱法测定草鱼组织中喹乙醇代谢物的残留余海霞，张小军，杨会成，郑斌(1．浙江大学舟山海洋研究中心浙江舟山316021；2．浙江省海洋开发研究院浙江舟山316100；3．浙江省海洋水产研究所浙江舟山316100)摘要：建立了草鱼组织中喹乙醇代谢物3一甲基喹嗯啉一2一羧酸的碱水解一高效液相色谱测定方法。草鱼肉组织通过碱水解提取MQCA，阴离子固相萃取柱净化，高效液相

2、色谱定量。方法在4．0～200．0kg的添加范围内的平均回收率为80．5％一86．5％，相对标准偏差均小于6％，方法检出限为4．0kg。[中国渔业质量与标准，2012，2(1)：67—7O]关键词：高效液相色谱；喹乙醇；代谢物；草鱼；残留中图分类号：TS201．6文献标志码：A文章编号：2095—1833(2012)01—0067—04喹乙醇结构上属于喹嗯啉类化合物，是一种化学捣碎，混合均匀。合成的抗菌促生长剂。喹乙醇曾一度在动物养殖业中氢氧化钠、盐酸：分析纯，上海试剂集团。甲酸、作为一种较好的生长促进剂添加饲料中。喹

3、乙醇结构甲醇、乙酸乙酯：色谱纯，MERK公司。3一甲基喹嗯不稳定，在动物体内能够代谢为l0多种代谢产物，其啉一2一羧酸标准品：纯度>98％，CSS公司。其他使中3一甲基喹嗯啉一2一羧酸(MQCA)是主要代谢物，用的试剂均为分析纯。在体内相对稳定，是喹乙醇监控常用的目标残留物。1．1．2仪器设备喹乙醇及其代谢物有致癌、至畸变作用，食用含有该类高效液相色谱仪配备紫外检测器(Alliance药物残留的肉类产品，会对人体造成危害I2j。2695，美国Waters公司)；漩涡混合器(MS2，德国IKA目前水产品中常用的MQCA检

4、测方法有纳米胶公司)；匀浆机(T18，德国IKA公司)；高速离心机体金探针法_3J、液相色谱法J、液相色谱一串联质谱(Centrifuge5810，Eppendorf公司)；氮吹仪(N—法J、气相色谱一质谱法【。纳米胶体金探针法主EVAP112，Organomation公司)；阴离子交换(MAX)固要用于定性半定量，不能够准确定量。液质联用的方相萃取柱(60rag／3mL，Waters公司)；水浴恒温振荡法由于仪器在检测机构没有完全普及，限制了这一检器(SHA—B，亿通电子有限公司)。测方法的应用。液相色谱法目前多采用

5、酶水解的1．2实验方法方法，其前处理往往时间较长且较为复杂。本研究尝1．2．1提取试通过碱水解前处理并使用固相萃取方法进行净化，称取(5±0．02)g样品置于50mL离心管中，加研究建立适用于草鱼组织中3一甲基喹嗯啉一2一羧入15mL2mol／LNaOH溶液，匀浆5rain，盖塞震荡酸测定的高效液相色谱方法，为喹乙醇代谢物监控提碱解30min，将碱水解液8000r／min离心10rain，收供灵敏度高、重现j生好的定量分析方法。集上清液，用盐酸调pH至中性后，用滤纸过滤。1．2．2净化1材料和方法MAX固相萃取柱依次用

6、3mL甲醇、3mL水活化，待溶液流至填料上层以下，加入样品碱水解液，控1．1实验材料与仪器设备制流速小于3mL／min，待样液全部流出后用3mL1．1．1实验材料0．05mol／L乙酸钠甲醇溶液淋洗固相萃取柱，待样品样品为草鱼，购自舟山东河市场，用组织捣碎机全部流出后将固相萃取柱吹干。最后用3mL含2％收稿日期：2011—08—21；接收日期：2011—12—09资助项目：舟山市科技合作项目(2011C32016)作者简介：余海霞(1981一)，女，硕士，工程师，研究方向为水产品加工及质量安全。E—mail：haixi

7、ahome@gmail．sore通信作者：郑斌，教授级高工，主要从事水产品加工及质量安全研究。E—mail：zhengbin67@163．corn68中国渔业质量与标准甲酸的乙酸乙酯溶液洗脱，洗脱液在40cC下用氮吹会带入大量脂肪、色素等成分，影响MQCA的提取效仪氮气吹干。加人1．0mL流动相溶液溶解残渣并漩果。先前的研究“使用酸水解法可以将MQCA涡混匀，最后过0．45m尼龙滤膜后上机测定。从动物组织中分离。本研究采用碱水解方法可有效1．2．3色谱条件将MQCA从肌肉组织中分离，且强碱能水解蛋白质，∞lJu日0JI

8、=，s、色谱柱：SunfireC18柱(250mm×4．6mm，5大大降低提取液中的杂质成分，提高后续净化效果。m)。流动相：甲醇+1．0％甲酸水溶液(40：60，V／实验分别以NaOH浓度和碱解时间对水解过程进行)。柱温：30℃。流速：1．0mL／min。进样量：50研究，用0．5、1、2、3、4mol／L的NaOH溶液对样品进