番茄灰霉生防菌的筛选、鉴定和生防机制初探

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1、河北农业大学硕士学位论文番茄灰霉生防菌的筛选、鉴定和生防机制初探姓名：魏东盛申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：刘大群2002.6.1fu』JE农业大学硕士学位论文摘要本研究采用稀释法从土壤、叶子、根和花4种不同的样本中分离细菌，共分离得到315株．采用平板法和叶盘法相结合的方法对其进行初步筛选和再次筛选，经初步平板筛选后，有95株细菌对番茄灰霉有抑制作用．经过第一次叶盘法筛选后，有44株在叶盘上有抑制作用，其中有12株能较强抑制灰霉菌生长．在第二次叶盘法筛选中得到2株既能在无营养平板上扩展又能在叶盘上抑制灰霉菌生长的菌株．第三

2、次叶盘试验表明，这两个菌株能在叶盘上完全、持久的抑制灰霉菌的生长．在叶盘上抑制作用较为明显的6个菌株中有3株来自于植物的地上部分，抑制作用最强的菌株B21和B14来自于重病田的健康番茄植株．厂／对B21的鉴定结果表明，无论是它的形态特征还是生理生化特征均与枯草芽(孢杆菌的特征相符合，因此初步确定其为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)．用平板对峙生长法对B21的菌体抑菌谱进行测定，结果表明，B21是一株有较广抑菌谱的生防菌株，除能抑制灰霉菌之外，还能抑制棉花黄萎菌等多种病原菌．用摇瓶发酵的方法对B21的发酵条件进行了初步筛选

3、．结果表明，在所选的培养基为Ps，发酵温度为30"C、转速为200rpm、初始pH值为6、发酵时间为36h时产生的抑菌物质的抑菌活性最强．温室防治试验结果表明，在提前24h接种灰霉菌的孢子悬浮液的情况下，菌株B2I无菌发酵液能显著抑制灰霉病的发生，防治效果比常用的农药万霉灵500倍稀释液效果还要好，因此，它有可能成为一种有效的生防制剂．用平板法、叶盘法结合组织透明法对B21的生防机制进行了初步研究．用洋葱内表皮所做的组织透明实验结果表明，在洋葱内表皮上灰霉菌的孢子萌发和菌丝生长均受到抑制，并且灰霉菌的分生孢子形状发生畸变．叶盘法实验结果

4、表明，无菌发酵液在叶盘上同样也能抑制灰霉菌孢子萌发和菌丝生长．因此可以确定，枯草芽孢杆菌B21能分泌某种抑菌物质．平板对峙试验表明，这种抑菌物质能使真菌的菌丝变粗，细胞壁产生空洞，造成细胞的内容物流出，菌丝断裂．!型!坐些盔堂堡：!堂生堡苎．——用菌丝生长法对无菌发酵液有效制物质的性质进行初步研究结果表明，饱和度为80％的硫酸铵能沉淀下大部分的抑菌活性，因此这种抑菌物质很可能为多肽类的物质．关键词：生物防治；灰霉菌；芽孢杆菌；菌株筛选；菌株鉴定独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，

5、除了文中特￡,JJJn以标注和致谢的地方外．论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得：j韭业型星．或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：青如青．盈签字日期：死口二年，月砧扫学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解芝目j挝＆业碰有关保留、使用学位论文的规定．有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁址，允许论文被查阅和借阅．本人授权主鞋酋签生：=＆监可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

6、用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文．(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：魏氰重签字日期：乱磷g月≯≥日学位论文作者毕业后去向工作单位：通讯地址：导师签名：a1签字日期：2“≯年电话邮编7跏。月tg番茄灰霉生防菌的筛选、鉴定和生防机制仞探1灰霉病防治研究现状文献综述1．1灰霉菌的生物学特性和培养条件灰霉病(graymould)是蔬菜生产上一种世界性的主要病害，病原为Botrytiscinerea称灰葡萄孢，属半知菌亚门真菌．有性世代为Sclerotiniafuckeliana(deBary)Fuckel，称

7、富克尔核盘菌，属子囊菌亚门．它能危害番茄⋯、草莓∞1、梨【4J’洋葱151等多种蔬菜和瓜果．病原菌多从开败的雌花侵入，致使花瓣腐烂，并且长出淡灰绿色的霉层，使幼果迅速变软，被害部位停止生长、腐烂或者脱落1“，烂花或者烂果附着在茎上引起茎部病害，严重时下部的茎腐烂使上部枯死．李保聚【7’等通过人工接种的方法研究它的发病规律时也发现，灰霉菌侵染番茄果实的最初部位是残留的花瓣和柱头，随后扩展到果蒂部和脐部，最后蔓延到果实的其它部位．灰霉菌不但影响处于生长期的植物，有时它不在生长的植株上表现症状，而是处于潜伏状态．在收获后的果实储藏和运输过程中

8、，由于储藏箱中的湿度大、温度低而大规模发病‘89”I，使得果实的市场价格受到严重影响，农民的经济利益受到很大损失．除了侵染蔬菜和瓜果外，灰霉菌还能侵染一些观赏性植物如玫瑰f“I，给花农也造成很大的经济损失．