白藜芦醇和褪黑素对奶牛性控冻精精子质量和体外受精能力的影响

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1、：密级：论文编号中国农业科学院学位论文白藜芦醇和褪黑素对奶牛性控冻精精子质量和体外受精能力的影响ＥｆｆｅｃｔｏｆＲｅｓｖｅｒａｔｒｏｌａｎｄＭｅｌａｔｏｎｉｎｏｎｔｈｅｕａｌｉｔａｎｄＩｎＶｉｔｒｏＱｙＡ－ｏｒｅｄＨｏＦｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｂｉｌｉｔｏｆＳｅｘｓｔｌｓｔｅｉｎＢｕｌｌＳｐｅｒｍａｔｏｚｏａｙ硕士研究生：李崇阳指导教师：赵学明研究员申请学位类别：农业推广硕士专业领域名称：动物繁殖培养单位：北京畜牧兽医研究所研究生院２０１８年５月

2、密级:论文编号:中国农业科学院学位论文白藜芦醇和褪黑素对奶牛性控冻精精子质量和体外受精能力的影响EffectofResveratrolandMelatoninontheQualityandInVitroFertilizationAbilityofSex-sortedHolsteinBullSpermatozoa硕士研究生：李崇阳指导教师：赵学明研究员申请学位类别：农业推广硕士专业领域名称：动物繁殖培养单位：北京畜牧兽医研究所研究生院2018年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalS

3、ciencesDissertationEffectofResveratrolandMelatoninontheQualityandInVitroFertilizationAbilityofSex-sortedHolsteinBullSpermatozoaM.S.Candidate：LiChong-yangSupervisor：ZhaoXue-mingDegree：MasterofAgriculturalExtensionSpecialty:AnimalReproductionMay2018摘要利用流式分选的奶牛性控冻精人为控制犊

4、牛出生后的性别，可实现畜牧生产利润最大化；同时，性控冻精在商业化的体外性控胚胎生产中起重要作用。但性控冻精分选过程会去除富含抗氧酶的精浆，导致内源性抗氧化酶的不足，同时刺激精子氧化应激产生过量的活性氧（ROS），破坏精子内部抗氧化防御体系的平衡，造成精子氧化应激损伤。褪黑素（MT）和白藜芦醇（Res）作为高效的外源性抗氧化剂，可去除ROS，提高常规冻精质量，但在奶牛性控冻精中的研究非常罕见。因此，本研究通过在3头荷斯坦奶牛性控冻精解冻后的洗精液和受精液中添加不同浓度的Res和MT处理，检测了不同浓度抗氧化剂对性控冻精质量和受精能

5、力的影响，探究了这两种抗氧化剂在奶牛性控冻精中的最佳作用浓度，并应用MT受体抑制剂，探究了MT受体对精子受精能力的影响。研究结果如下：-31.在3头牛性控冻精解冻后，在其洗精液和受精液中分别添加不同浓度的Res（0M、10M、-4-5-610M、10M、10M），经1.5h孵育后，分析了不同浓度的Res处理对奶牛性控冻精ROS水平、磷脂酰丝氨酸（PS）外翻、线粒体膜电位（Δψm）、ATP和丙二醛（MDA）含量、顶体完整性、-3-4以及囊胚率和囊胚质量的影响。结果表明：(1)10M和10M的Res处理组精子的ROS和MDA-3-4

6、水平显著低于对照组(P<0.05)；(2)10M和10M的Res处理组中未发生凋亡活精子和高Δψm，-4以及较高ATP含量的精子比例显著高于对照组(P<0.05)；(3)10MRes处理组顶体完整的活精子比例以及囊胚率和囊胚质量显著高于对照组(P<0.05)。因此，在性控冻精洗精液和受精液中添-4加10MRes处理可显著降低其ROS水平、PS外翻比例、MDA水平，并保护线粒体功能和顶体完整性，从而提高性控冻精囊胚率和囊胚质量。-3-52.在3头牛性控冻精解冻后，在洗精液和受精液中分别添加不同浓度MT（0M、10M、10-7-9M

7、、10M、10M），经1.5h孵育后，分析了不同浓度的MT处理对奶牛性控冻精ROS水平、MDA水平、凋亡事件（PS外翻、Δψm）、内源性抗氧化酶（GSH-Px、SOD、CAT）活力水平、2+2+顶体膜完整性、获能及获能相关事件（胞内Ca水平，[Ca]i；环磷酸腺苷水平，cAMP水平）；-5以及IVF能力的影响。结果表明：10MMT处理可显著降低性控冻精ROS含量，提高GSH-Px、SOD、CAT酶活力水平，从而抑制精子PS外翻和MDA水平，提高精子Δψm、顶体完整性、获能反应相关变化和受精能力。-53.通过WesternBlot

8、确定奶牛性控精子中MT1和MT2受体的存在，以及根据实验证实10M-5MT可有效提高性控冻精受精能力，10MMT处理3头牛的性控冻精时分别添加MT受体抑制剂4-P-POD和Luzindole，检测对性控冻精精子获能相关事件的影响。结果显示：MT通过MT1受体参与