抑食金球藻（秦皇岛株）细胞毒性及溶血活性研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：抑食金球藻（秦皇岛株）细胞毒性及溶血活性研究ＣｙｔｏｔｏｘｉｃｅｆｆｅｃｔａｎｄｈｅｍｏｌｙｔｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆＡｕｒｅｏｃｏｃｃｕｓａｎｏｐｈａｇｅｆｆｅｒｅｎｓ（Ｑｉｎｈｕａｎｇｄａｏｓｔｒａｉｎ）作者姓名：谢磊指导教师姓名及学位、职称：江天久硕士研究员学科、专业名称：海洋生物学与生物技术学位类型：学术学位论文提交日期：论文答辩日期：答辩委员会主席：论文评阅人Ｉ：学位授予单位和曰期：雅创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导

2、师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。祿了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料》与一我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名签字日期发年名月”曰学位论文版权使用授权书■ａ本学位论文作者完全了＿暨南大＃有关保留、使用学位论文的规定，有权保。留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅率人授权暨南大学可以将学位论文的全鄯或部分内容编入有关数据库迸行检索，

3、可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在觯密后适用本授权书）学位论文作者签名：胃＾导师签名：签字日期年名月日签字日期年／月糾日１学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址；暨南大学硕士学位论文摘要２００９年，我国河北省秦皇岛沿岸海域首次暴发褐潮，且之后连续多年均有不同规模的褐潮暴发。褐潮的发生严重影响了当地的海洋生态系统并对海洋资源和贝类养殖业构成威胁。虽然褐潮对海洋生物的影响人们已经有了系统的认知，但褐潮藻（抑食金球藻）对海洋生物的致害机制到目前为止人们还尚无定论。

4、褐潮藻是否产生毒素、毒素的理化性质和作用机制如何都还需要进一步探索。本论文以ＰＣ１２神经细胞为研宄对象，使用抑食金球藻细胞提取物进行褐潮藻毒性效应的研宄。首先从细胞增殖、胞外乳酸脱氢酶渗漏、细胞形态学变化及细胞凋亡／坏死等方面探讨。抑食金球藻的细胞毒性效应根据抑食金球藻细胞毒性效应的实验结果，提出抑食金球藻细胞毒性可能是由溶血活性而导致的假设。基于此，运用光学显微镜和ＡＦＭ原子力显微镜观察抑食金球藻细胞提取物对兔血红细胞的溶血现象；采用薄层色谱法对抑食金球藻溶血毒素进行初步的分离鉴定；研宄多种理化因子（温度、ｐＨ、氧化剂和还原剂及二价金属

5、离子）对抑食金球藻溶血活性的影响；以渗透保护实验及磷脂酶活性检测分析抑食金球藻溶血毒素的溶血方式，为抑食金球藻毒性效应的深入研宄奠定基础，也为分析褐潮藻的危害机制提供了新的思路。本研宄的主要结论如下：抑食金球藻氯仿提取物对ＰＣ２－１细胞的增殖具有抑制作用，且该作用呈现出时间、剂量效应关系，染毒３６ｈ的ＩＣ５Ｑ为而抑食金球藻甲醇提取物对ＰＣ１２细胞增殖则无明显影响，提示抑食金球藻氯仿提取物具有细胞毒性，其中可能含有毒性物质；胞外乳酸脱氢酶结果显示，较低剂量水平的抑食金球藻氯仿提取物即可促进细胞乳酸脱氢酶的漏出－，且漏出的量呈剂量效应

6、关系，说明抑食金球藻氯仿提取物可破坏细胞膜的完整性；形态学观察显示，抑食金球藻氯仿提取物作用细胞３６ｈ后，细胞形态即发生显著变化，细胞细胞形态呈现出回缩变形、细胞变圆、脱壁、肿胀，细胞突起变短变少等特点，这些特性与凋亡的形态学变化不符ｘｍＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染流式细胞，暗示细胞可能发生坏死；使用ＡｎｎｅＩ暨南大学硕士学位论文术进行细胞凋亡与坏死的检测，发现即使是最低剂量的抑食金球藻氯仿提取物也可诱导细胞发生坏死，且坏死率随着剂量的增加而增加。在光学显微镜下可见一，载玻片涂有抑食金球藻氯仿提取物的侧，兔血红细胞几乎完全一破碎，而

7、在未涂有提取物的侧绝大多数的血细胞则完好无损，说明抑食金球藻氯仿提取物具有很强的溶血活性（ＡＦＭ）结果显示，经抑食金球藻溶血毒素处理的血红；原子力显微镜细胞，细胞形态发生严重变形，呈棘红样改变，细胞表面较为粗糙，提示抑食金球藻溶血毒素对血红细胞形态的破坏较为严重；实验室条件下培养的抑食金球藻溶血活性约为２１．３３土－１１．ＸＫ＾ＨＵ０．４５ＨＵＬ，单个藻细胞中的溶血单位为（１．４２±０．０３）ｃｅｉｒ显示，；薄层层析结果抑食金球藻溶血毒素可能为糖脂类化合物，至少含有２种组分，Ｒｆ分别为：０．９０和０．７６。°一４－３７Ｃ在定的温度范