人参皂苷Rh2的人类内靶点鉴定及抗肿瘤分子机制研究

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1、分类号：Q26单位代码：10183研究生学号：2014341010密级：公开人参皂苷RH2的吉林大学人类靶博士学位论文点鉴定及抗人参皂苷Rh2的人类靶点鉴定及抗肿瘤分子机制研究肿瘤分Researchontheidentificationofhumantargetsof(20S)G-Rh2and子机molecularbasisforitsanti-canceractivity制研究作者姓名：王宇石王专业：细胞生物学宇石研究方向：肿瘤细胞信号转导及抗癌药物研发指导教师：金英花教授培养单位：生命科学学院2018年5月吉林大学人参皂苷Rh2的人类内靶点鉴定及抗肿瘤分子机制研究Rese

2、archontheidentificationofhumantargetsof(20S)G-Rh2andmolecularbasisforitsanti-canceractivity作者姓名：王宇石专业名称：细胞生物学指导教师：金英花教授学位类别：理学博士论文答辩日期：2018年6月4日授予学位日期：年月日答辩委员会：姓名职称单位主席：施维教授吉林大学委员：陆军教授东北师范大学巴雪青教授东北师范大学邹志华教授吉林大学房学迅教授吉林大学李桂英教授吉林大学《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的

3、学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。论文级别：□硕士■博士学科专业：论文题目：作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林省长春市前几大街2699号吉林大学前卫南区生命科学楼238，130021作者联系电话：0431-85166278摘要(20S)G-Rh2是人参加工成红参过程中产生的次级皂苷，具有出色的抗肿瘤活性。研究表明，(20S)G-Rh2可诱导人白血病

4、细胞、人宫颈癌细胞、人卵巢癌细胞、人肺癌细胞、人肝癌细胞和人乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞的细胞凋亡，并且(20S)G-Rh2同时启动线粒体途径和和膜死亡受体途径高效杀死癌细胞。(20S)G-Rh2还可通过抑制JNK、Akt、MAPK和β-catenin信号通路诱导肿瘤细胞周期G1期阻滞，抑制肿瘤细胞的生长。在乳腺癌细胞中，(20S)G-Rh2可以抑制microRNA介导的多重药物抵抗。在人多形型恶性胶质瘤细胞中，(20S)G-Rh2通过下调血管内皮生长因子A，抑制EGFR/PI3k/Akt/mTor信号通路，降低肿瘤细胞的侵袭转移能力。动物水平研究表明，(20S)G-Rh2同

5、样抑制多种种植瘤在小鼠中的生长。本文旨在通过对(20S)G-Rh2相互作用蛋白质的研究，揭示(20S)G-Rh2的细胞内靶点，并最终阐述(20S)G-Rh2抗肿瘤作用的分子机制。为探索与(20S)G-Rh2相互作用的蛋白质，我们分别使用(20S)G-Rh2-PEGA树脂和(20R)G-Rh2-PEGA树脂对人肝癌细胞HepG2的全细胞裂解液进行了pull-down分析，通过液相色谱串联质谱分析获得了381个蛋白质。通过比较上述蛋白质在(20S)G-Rh2-PEGA树脂和(20R)G-Rh2-PEGA树脂的相对丰度，我们获得了113个与(20S)G-Rh2具有较强结合能力的蛋白

6、质。通过检索上述蛋白质在肝细胞癌中的相对表达水平，我们确定了13个在肝癌细胞中高表达的蛋白质。结合(20S)G-Rh2相互作用蛋白质组的GO分析，最终选择AnnexinA2进行深入的功能研究。AnnexinA2蛋白质是重要的多功能蛋白质，在细胞增殖、细胞迁移、细胞粘附等过程中发挥重要作用。AnnexinA2蛋白质可以通过膜结构依赖的途径，与S100家族蛋白形成复合体，促进蛋白质在膜表面的募集，促进细胞增殖和细胞迁移；非膜结构定位的AnnexinA2蛋白质通过促进转录因子STAT3、STAT6和NF-κB的激活，上调下游炎症因子和抗细胞凋亡基因的表达，促进细胞的生存。在多种肿瘤

7、细胞中，AnnexinA2蛋白质过度表达，促进肿瘤细胞的生存、生长、迁移以及耐药性的产生。为检测AnnexinA2蛋白质与I(20S)G-Rh2的直接相互作用，我们进行了等温滴定量热分析、分子对接分析、竞争性pull-down分析和热漂移分析，最终确定AnnexinA2蛋白质直接结合(20S)G-Rh2，证明了AnnexinA2蛋白质是(20S)G-Rh2的细胞内的靶点。在肝细胞癌的发生和发展过程中，NF-κB对肿瘤进程有促进作用。早期肝脏损伤激活NF-κB，上调促生存基因的表达，抑制受损细胞的死亡；同