蛴螬抗菌肽PLGA微球的制备及其抗菌性能的研究

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1、硕士学位论文蛴螬抗菌肽PLGA微球的制备及其抗菌性能的研究作者姓名王成学科专业食品科学与工程指导教师余以刚教授所在学院食品科学与工程论文提交日期2018年04月PreparationofGrubAntimicrobialPeptideMicroparticlesandReseachonItsAntimicrobialPropertiesADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：ChengWangSupervisor：Prof.YigangYuSouthChinaUniversityofTec

2、hnologyGuangzhou,China分类号：学校代号：10561学号：201520120920华南理工大学硕士学位论文蛴螬抗菌肽PLGA微球的制备及其抗菌性能的研究作者姓名：王成指导教师姓名、职称：余以刚教授申请学位级别：硕士学科专业名称：食品科学与工程研究方向：食品质量与安全论文提交日期：2018年04月20日论文答辩日期：2018年06月06日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：成委员：摘要使用胰蛋白酶酶解蛴螬蛋白制备出对大肠杆菌（革兰氏阴性菌）和金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）都有抑菌活性的小分子抗菌肽。以加

3、酶量，酶解时间，料液比和酶解pH为因素，用单因素分析法和四因素四水平正交实验法确定了胰蛋白酶酶解蛴螬蛋白制备抗菌肽的最佳实验条件。结果表明：当加酶量为50.0ku/g，酶解时间为90min，料液比为1:10(g/mL)和酶解pH为7.5时，制备得到的酶解产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，抑菌圈直径分别为8.7mm和11.5mm。通过阳离子交换树脂对酶解产物进行初步纯化，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，研究了纯化得到的抗菌肽组分的环境稳定性。结果表明：阳离子交换色谱分离出5个组分，其中第三个吸收峰（GPP3）对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑

4、制效果最好，抑菌圈直径分别为13.7mm和17.2mm。纯化得到的蛴螬抗菌肽在环境pH为6.0时，抑菌活性最好；抗菌肽具有极好的温度稳定性，处理温度为100°C时，仍具有良好的抗菌活性；当环境中盐浓度超过80.0mmol/L时，抑菌活性开始下降；纯化得到的抗菌肽具有良好的耐胰蛋白酶水解活性，但不具备耐胃蛋白酶水解活性。以聚乳酸羟基乙酸聚合物为多肽载体，以多肽包封率为主要指标，研究了内水相中多肽浓度，有机相聚乳酸羟基乙酸聚合物浓度，内水相与有机相体积和比例对包封率的影响。研究表明：当多肽浓度为2.5mg/mL，聚合物浓度为2.5mg/mL，内水相和有机相

5、体积分别为4.0mL和2.0mL时，制备得到的PLGA微球多肽包封率最高为79.80%；此时，PLGA微球粒径为1.5μm，多肽载药量为10.83%。研究了PLGA微球在不同模拟液中的体外释放过程、耐胃蛋白酶水解能力和细菌细胞结构完整性的影响等。结果表明：抗菌肽PLGA微球在水中的释放情况符合Higuchi方程所代表的动力学规律，在模拟胃液中的释放情况符合一级动力学方程所代表的动力学规律；制备的PLGA微球具有良好的耐胃蛋白酶水解能力；扫描电镜图显示，抗菌肽PLGA微球能使大肠杆菌细胞膜破裂；抗菌肽PLGA微球对金黄色葡萄球菌的细胞膜整体结构没有明显的

6、影响，可能是抗菌肽以“毯式模型”作用于细胞膜，进入到细胞中，影响细胞代谢系统而产生抑菌作用的。关键词：蛴螬；抗菌肽；PLGA微球；抗菌活性IAbstractInthispaper,grubproteinwashydrolyzedbytrypsintopreparesmall-moleculeantimicrobialpeptideswithinhibitoryactivityagainstStaphylococcusaureus(Gram-positivebacteria)andEscherichiacoli(Gram-negativebacteria

7、).Theoptimumconditionsforthepreparationofantimicrobialpeptidesbytrypsindigestionweredeterminedbysinglefactoranalysisandorthogonalexperimentwithfourfactorsandfourlevels.Theresultsshowedthattheoptimalconditionswasenzymedosage50.0ku/g,enzymolysistime90min,solid-liquidratio1:10(g/mL

8、)andpH7.5,undertheseconditions,thehydrolyzatesh