门冬酰胺酶生产菌种复壮及5000L规模发酵工艺优化研究

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1、ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｏｙｌｇｙ工程硕士学位论文门冬酰胺酶生产菌种复壮及５０００Ｌ规模发酵工艺优化研究—作者姓名蓝碧锋工程领域生物工程＋父内指导教师振强教授＾校外指导教师梁淑娃教授级高工所在学院生物科学与工程学院论文提交日期２０１８年３月￣＿．＿ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＳｔｒａｉｎＲｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎａｎｄＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＯｔ－ｐｉｍｉｚａｔｉｎｉｎ５０００ＬＳｃａｌｅｕ

2、ｐｆｏｒＬＡｓａｒａｉｎａｓｅｐｇｏＡｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒ？Ｃａｎｄｉｄａｔｅ：ＬａｎＢｉｆｅｎｇ■ｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＷｕＺｈｅｎｉａｎＳｐｑｇＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｙｇｙＧｕａｎｚｈｏｕＣｈｉｎａｇ，ｉｉ！分类号：１０５６１：Ｑ８１５学校代号学号：２０１２２０２０９３３８华南理工大学硕士学位论文

3、门冬酰胺酶生产菌种复壮及５０００Ｌ规模发酵工艺优化研究：工作者姓名：蓝碧锋申请学位级别程硕士工程领域名称：生物工程校内指导教师姓名：：梁淑、职称吴振强教授校外指导教师姓名、职称娃教授级高工论文形式：口产品研发口工程设计０应用研究□工程／项目管理口调研报告研究方向：生物工程工驾研宄０１８：２１论文提交日期：２年３月９日论文答辩日期０１８年３月７日学位授予单位：华南理工末学学位授予日期：年月曰答辩委员会成员：主席：刘津忠：张菊梅委员、王菊芳、关

4、溯、李杉华南理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研宄所取得的研宄成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年￥月学位“文版权使用授权书本学位论文作＃完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，艮口：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位

5、属华南理工大学。学校有权保存并向国家齊关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅（除在保密期内的保密论文外）；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文一。本人电子文＋当的内容和纸质论文的内容相致。本学位论文属□保密，（校保密委员会审定为涉密学位时间：）＿＿年＿月＿日于年解密后适用本授权书。＿＿月＿日＆不保密，同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览；同意將本人学位论文提交中国学术期刊

6、（光盘版）电子杂志社全文出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，传播学位论文的全部或部分内容。“”（请在以上ｆ目应方框内打Ｖ）作者签名：雜沒曰期：＜指导教师签名日期》Ｕ－作者联系电话：１３５８０３＋９９８电子邮箱：ｌａｎｂｆ０９１４＠１６３．ｃｏｍ联系地址（含邮编）：广州市荔湾区花地大道南３０号６０６房５１０３８０摘要本论文针对门冬酰胺酶生产菌小规模生产过程中不稳定的问题，对欧文氏菌进行复壮筛选，并对放大至知００Ｌ罐规模的系列问题进行研宄和探索，实现

7、门冬酰胺酶发酵工艺的优化。研宄结辦如下：１、通过紫外线＋ＬＣ１复合诱变法复壮筛选出３株产酶能力强、性状稳定的欧文氏菌－－突变株ＦＺ１１５３４．９ＩＵ／ｍＬ，其中产酶能力最强的号菌株摇瓶发酵门冬酰胺酶的效价为，比出发菌株提高了５６．％。￥２Ｐ－Ｂ＿ａｎ、通过碳源、氮＿、复合氮源和无机盐等单因素试验、ｌａｃｋｅｔ和响应面分析法优化研究，得出最佳发酵培养基配方：胰蛋白胨２．２％＋谷氨酸钠２．１％＋玉米浆培养基灭菌方式采用°２％＋酵母粉０．５％＋ＮａＣ１０．５％，ｐＨ７．０；

8、１２１Ｃ、３０ｍｉｎ湿消。一通过三角瓶改良和摇瓶发酵培养试验：，确定了级生产种子培养的关键工艺控制参数°培养温度为３７Ｃ，１０如ｍＬ摇瓶的培养基装量为２５０ｍＬ，接种量为１．５％，摇床转速为２２０ｒ／ｍｉｎ，培养周期为１８ｈ。试验证明剪切力对发酵有显著的负面影响，在工艺控制中应通过调控通风量和罐压力等手段减少剪切力的影响因素。３Ｌ智能发－－、在５０酵罐上进行了复壮菌株ＦＺ１１５的发酵工艺研宄。试验结果得出：欧文氏菌￣５