《微生物学大实验终》PPT课件

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1、微生物学实验指导教师：任晓冬单亚明实验流程土壤样品中微生物的分离纯化细菌酵母菌霉菌放线菌形态结构观察生理生化反应nisin效价测定生长曲线测定形态观察死活细胞鉴定直接计数测微技术形态结构观察培养菌种保藏土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏相关理论知识（1）微生物的分离与纯化从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。常用的分离、纯化方法微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏相关理论知识（2）土壤生境土壤是

2、微生物生活的大本营，所含微生物无论数量还是种类都极其丰富,因此,土壤是微生物多样性生长的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏相关理论知识（3）乳酸菌乳酸菌是一类能在碳水化合物发酵过程中产生大量乳酸的细菌，在酸奶中大量存在。乳酸菌形态球形、类球状、短杆或杆状，有些细胞有芽孢。代谢产物以乳酸为主要代谢产物，有些乳酸菌可以产生乳链菌肽（Nisin)，乳链菌肽有抑菌活性。土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏目的要求1、了解微生物分离和纯化的原理。2、掌握常用的

3、分离纯化微生物的方法。3、掌握倒平板的方法。4、进一步熟练和掌握微生物的无菌操技术。5、掌握微生物的培养方法。土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏实验原理（1）微生物分离与纯化从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于微生物生长的培养条件（如营养成分、酸碱度、温度和氧等,或加入某种抑制剂），在平板上培养微生物，当平板上长出单菌落后，挑取，得到纯种的微生物土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏实验原理（2）分离产Nisin的乳酸乳球菌时，要用选择性平板能够产生Nisin的乳酸菌，自身会有对一定浓度的Nisin的抗

4、性，而很多其它的细菌不具有这种抗性。所以，在纯化乳酸乳球菌时，要在平板中加入一定量的Nisin,使得对Nisin没有抗性的其它细菌被抑制，平板中的单菌落就有更大的可能性是我们需要的乳酸乳球菌采用在平板中加入抑制剂的方法是微生物学常用的分离纯化微生物的方法。土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏试剂与器材1、材料含大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、根霉、青霉和放线菌的土壤样品及酸奶样品，牛肉膏蛋白胨培养基（斜面、液体、半固体）、马丁氏培养基、查氏培养基等2、试剂10%酚、4%水琼脂3、器材盛9mL无菌水的试管、盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶、涂布器、无菌吸管、接种环，酒精灯、无菌培养

5、皿、显微镜、细胞计数板等。土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g琼脂15-20g用水定容至1000mlpH7.0-7.2用于分离细菌土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏查氏培养基NaNO32gK2HPO41gKCl0.5gMgSO40.5gFeSO40.01g蔗糖30g琼脂15-20g用水定容至1000ml用于分离霉菌土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏高氏一号培养基可溶淀粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO40.5gMgSO40.5gFeSO40.01g琼脂15-20g用水定容至1000mlpH7.2-7.4用于分离放

6、线菌土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏马丁氏培养基葡萄糖10g蛋白胨5gK2HPO41gMgSO40.5gFeSO40.01gpH自然用水定容至800ml用于分离酵母菌土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏M17培养基蛋白胨10g酵母粉5g抗坏血酸0.5g牛肉膏2.5gMgSO4·7H2O0.01g磷酸氢二钠19g0.04%溴甲酚紫16ml用水定容至1000ml乳链菌肽（Nisin)250mlNisin/1000ml培养基（Nisin单独灭菌)用于分离酸奶中的乳酸乳球菌从酸奶中分离乳酸乳球菌的操作与从土壤中分离细菌操作相同土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏实验步骤土壤中微生物的

7、分离纯化、培养观察及保藏倒平板土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏菌悬液的配制土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏菌液的稀释土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏接种土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏培养土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏微生物的纯种培养土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏注意事项1、接种环要灼烧灭菌。接触菌体前要冷却。接种后要在火焰上灼烧。2、实验在洁净工作台内进行，操作时菌体不应和火焰太过接近。3、本实验要严格