《疫学应用》PPT课件

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1、免疫学应用湘潭职业技术学院检验教研室邓阳勇第一节免疫学诊断一、抗原抗体的检测二、淋巴细胞的检测一、抗原抗体的检测原理：Ag与相应Ab在体内与体外可发生特异性结合检测原则：1.已知Ag检测未知Ab2.已知Ab检测未知Ag细菌学诊断标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。标本采集与送检原则致病菌的检验程序

2、标本生化试验血清学试验动物试验药敏试验直接涂片检查分离培养分子生物学技术（核酸杂交、PCR）其它(HPLC)人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高

3、大于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。血清学诊断体外抗原抗体反应抗原抗体反应1、抗原抗体的结合与析出2、抗原抗体反应的特点3、抗原抗体反应的影响因素引起抗原抗体结合的作用力1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（VanderWaals力）3、氢键结合力4、疏水作用力抗原抗体结合物析出的原因析出+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—电解质+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++

4、——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—抗原抗体反应的特点1、特异性2、适合比例性3、可逆性网格学说（latticetheory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAgAb抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）经典的血清学反应抗原或抗体的检测方法类型抗原抗体辅助物敏感度（g抗体氮）凝集反应颗粒性凝集素0.01沉淀反应可溶性沉淀素5-10补体溶血反应红

5、细胞溶血素补体0.001-0.3G-细菌溶菌素补体（同上）补体结合反应固定补体抗体补体SRBC溶血素0.1中和反应外毒素抗毒素靶细胞0.01病毒中和抗体靶细胞（同上）凝集反应直接凝集反应玻片法：ABO血型鉴定试管法：肥达试验颗粒性抗原抗体（凝集素）正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测可溶性抗原载体颗粒抗体（凝集素）反向间接凝集反应抗体可溶性抗原载体颗粒间接凝集抑制反应如妊娠诊断试验检测HCG凝集凝集抑制待检样品待检样品沉淀反应液相内沉淀反应絮状沉淀反应环状沉淀反应如法医学血迹鉴定++——抗血清抗原抗原抗

6、体凝胶内沉淀反应免疫扩散技术免疫电泳技术单向扩散试验双向扩散试验火箭电泳对流电泳免疫电泳免疫标记技术主要的免疫标记物类别标记物用途荧光素FITC、RB200、TRITC免疫组化镧系元素螯合物免疫分析测定放射性核素3H、14C、32P、57Gr免疫分析测定125I、131I酶HRP、AP免疫组化免疫分析测定化学发光物Luminol、lucigenin免疫分析测定金属颗粒胶体金、铁蛋白免疫组化免疫分析测定标记免疫技术的分类一、按测定用途分类：1、免疫组化技术2、免疫测定技术二、按标记物分类：1、酶免疫技术2

7、、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术免疫荧光技术直接法间接法补体法双标记法放射免疫分析结合相游离相酶联免疫吸附试验ELISA间接法夹心法竞争法二、免疫细胞检测技术1、细胞表面标志检测2、细胞功能检测3、细胞因子检测表面标志检测常用的免疫细胞表面标志检测技术一、免疫标记检测1、荧光抗体法2、酶免疫检测法3、免疫金银染色法二、补体依赖的细胞毒试验（CDC）三、E花环形成试验SmIg的荧光抗体检测法SmIg的酶免疫检测法补体依赖的细胞毒试验（CDC）染料补体E-花环T细胞B细胞花环形成

8、细胞绵羊红细胞细胞功能检测一、转化、增殖试验1、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养二、细胞毒检测1、T细胞介导的细胞毒试验2、NK活性测定3、ADCC作用测定常用的免疫细胞功能检测技术放射性测定3H-TdR丝裂原（抗原）刺激淋巴细胞转化试验原理示意放射性测定细胞毒试验原理示意靶细胞效应细胞分离上清细胞因子检测可检测的细胞因子白细胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干扰素（Interferon）——IFN-