《疫学的应用》PPT课件

《《疫学的应用》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第三节免疫检测1一、抗原、抗体的检测抗原抗体反应，又称血清学反应（主要指体外的反应）。（一）抗原抗体反应的特点1、特异性和交叉反应2、可逆性(分子表面的结合)非共价键结合(范德华力∝分子空间构型的互补程度、静电引力、氢键、疏水性作用)是分离纯化抗原或抗体的理论依据23、比例性和可见性比例不合适——出现游离的抗原或抗体，小分子的免疫复合物形成，加电解质也不可见；比例合适——出现网格状的大复合物，游离的抗原或抗体少，加电解质，可见；因此，在抗原抗体反应中，为得到肉眼可见的反应现象，需要调整抗原、抗体的比例。4、阶段性①抗原抗体特异性结合阶段，短②可见反应阶段，长34抗原抗体

2、反应的主要影响因素1、抗原和抗体浓度、比例2、电解质在可见反应阶段发挥作用，0.85%NaCl。3、温度常选用37度，也有4度。4、pH一般在pH6~8。5（二）血清学反应的种类1、凝集反应（agglutinationreaction）概念：颗粒性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块的反应。反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。61、颗粒性抗原＋抗体直接凝集类别及应用：7玻片法8血凝反应强度示意图9试管法例：伤寒杆菌的诊断——肥达试验10可溶性抗原＋相应抗体不凝集2、可溶性抗原-无关载体＋抗体间接凝集正向反向11常用载体——RBC、聚苯乙烯

3、乳胶、活性碳、胶体金123、待测可溶性抗原＋抗体+可溶性抗原-无关载体间接凝集抑制13（二）沉淀反应（percipitationreaction）概念：沉淀原、沉淀素类别及应用：1、液体内的沉淀实验——环状沉淀反应、絮状沉淀反应2、凝胶内的沉淀反应——常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝胶等。3、免疫浊度试验14AbAg环状沉淀示意图沉淀管内径1.5～2mm1～5min出现沉淀环为阳性30min不出现沉淀环为阴性151:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量不变振摇混匀、37℃孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适

4、比例管轻摇絮状沉示意图淀AgAbAg16单扩17火箭电泳1819双向免疫扩散20双扩本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。21“1”为单一抗原抗体系统。“n”为多个抗原抗体系统。*可以用混合抗原鉴定抗体纯度。抗原抗体纯度鉴定*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。221.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。3.可进行任意稀释。抗体效价滴定23对流免疫电泳24免疫电泳常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。25（三）补体结合试验概念：组成：待检系统、

5、指示系统2627（四）中和试验①病毒中和试验血清＋病毒＋细胞细胞是否感染②毒素中和试验血清＋外毒素毒素活性作用是否丧失2829（五）免疫标记测定技术概念：用具有高敏感度的标记物，标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。分类：免疫组化技术、免疫测定常用标记物：酶、荧光素、同位素、胶体金等30大鼠VSMC平滑肌特异性α-Actin免疫组化染色照片31间接免疫荧光法检测自身抗体和病原体抗体321、免疫酶标记技术用酶标记抗体或抗抗体进行的抗原抗体反应。以底物被酶分解后的显色深浅来反应待检样品中抗原或抗体的含量。(1)常用酶：辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）(2)常用方法：

6、酶联免疫吸附试验33ELISA原理示意图34间接法35双抗夹心法36抗原竞争法37免疫荧光技术常用荧光素：1、异硫氢酸荧光素（黄绿色荧光）FITC,495nm2、罗丹明（红色荧光）RB2003、R—藻红蛋白R-PE38免疫荧光技术（可在同一标本中测多个抗原或抗体）39放射免疫分析法同位素分析的灵敏性＋抗原抗体反应的特异性优点：灵敏度高特异性强精确性好样品用量少测定方法规范、自动化常用同位素：125I、131I、3H、14C、32P40放射免疫测定WESTERN原理41免疫胶体金技术4243444546快速斑点免疫金渗滤法检测示意图47常用抗原抗体反应的相对敏感度（/L）

7、血清蛋白电泳（区带电泳）1000mg免疫电泳50～100mg单向免疫扩散〈10～20mg双向免疫扩散〈10mg火箭电泳〈5.0mg对流免疫电泳〈1.0mg免疫比浊1.0mg补体结合反应10ug凝集反应10ugELISA〈10ugRIA〈10ug48二、免疫细胞的检测在体外或体内，对机体免疫细胞进行鉴定、计数、功能测定。1、免疫细胞的分离自然沉降法密度梯度离心+花环试验（或黏附试验等）免疫磁珠法图流式细胞分离术图等49Percoll分层液5051流式细胞仪分离细胞522、免疫细胞的计数图各种血细胞1.2.3.单核细胞4.5.6.淋巴细胞7.