《炭疽检验技术》PPT课件

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1、炭疽检验技术辽宁省cdc炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。炭疽（Anthrax）发病、死亡污染环境形成芽胞经口食入食草动物通过直接接触、消化道、呼吸道等途径感染人类食肉动物偶尔感染革兰氏染色阳性；长而直的大杆菌，菌体两端平直；大小为1.0～1.5um×3～5um，致病菌中最大的；无鞭毛，不能运动。一、病原——炭疽杆菌（Bacillu

2、santhracis）荚膜染色在碳酸盐培养基中、厌氧环境下生成荚膜。一、病原——炭疽杆菌（Bacillusanthracis）炭疽杆菌在病人、病畜体内多散在或呈2～3个短链排列，有荚膜（红色）在活炭疽病畜体或死亡后未经解剖的尸体内，不形成芽胞。一旦体内炭疽杆菌暴露于空气中，接触了游离氧，在一定温度下(12--42℃)就会形成芽胞。芽胞呈卵圆形或圆形，位于菌体中央或稍偏向一端。一、病原——炭疽杆菌（Bacillusanthracis）A：炭疽芽孢薄片（透射电镜）有致密的胞膜B：炭疽芽孢（扫描电镜）收

3、缩成椭圆形C：炭疽繁殖体薄片（透射电镜）炭疽杆菌为兼性需氧菌，在12～44℃都能生长，最适生长温度为37℃。最适pH为7.3～7.6。在普通琼脂平皿培养基上生长成不透明、灰白色、扁平、表面粗糙的菌落，边缘不整齐，能形成几个或数十个菌体相连的长链，低倍显微镜观察呈卷发状。在血液琼脂平皿培养基上，生长出湿润粘稠的菌落，菌落周围不溶血。二、培养特性光镜下炭疽杆菌菌落边缘呈卷发状在血液琼脂平皿培养基上不溶血或微溶血三、致病性与免疫性致病物质:主要有二种荚膜:由质粒编码,具有抗吞噬作用炭疽毒素:由质粒编码（

4、致死主要因素）保护性抗原（protectiveantigen，PA）水肿因子（edemafactor，EF）致死因子(lethalfactor，LF)四、抵抗力芽胞抵抗力强煮沸40min或干热140ºC3h灭活；在干燥土壤或皮毛中能存活数年至20年；对化学消毒剂抵抗力强(5%石炭酸5d杀死）；对碘及氧化剂较敏感；繁殖体的抵抗力弱对青霉素、红霉素、氯霉素敏感炭疽病原学检查炭疽血清学检查五、炭疽实验室检查炭疽病原学检查标本采集和样品处理细菌培养涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查Ascoli试验动力检查

5、噬菌体裂解和青霉素敏感性试验串珠试验生化试验炭疽PCR基因检测五、炭疽实验室检查炭疽血清学检查标本采集和样品处理血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测（酶联免疫吸附实验ELISA）血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测五、炭疽实验室检查《人间传染的病原微生物名录》序号病原菌名称危害程度分类实验活动所需生物安全实验室级别学名中文名大量活菌操作动物感染实验样本检测非感染性材料的实验1Bacillusanthracis炭疽芽孢杆菌第二类BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-12Brucellaspp布鲁氏菌属第

6、二类BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-13Burkholderiamallei鼻疽伯克菌第二类BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-14Coxiellaburnetii伯氏考克斯体第二类BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1大量活菌操作：实验操作涉及“大量”病原菌的制备，或易产生气溶胶的实验操作（如病原菌离心、冻干等）。动物感染实验：特指以活菌感染的动物实验。样本检测：包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。非感染性

7、材料的实验：如不含致病性活菌材料的分子生物学、免疫学等实验。炭疽病原检验程序标本处理（方法根据标本情况选择）直接涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查接种培养（可用选择性培养基、血培养基）37℃，16~48hAscoli试验基因检测可疑菌落（形态）初检培养性鉴定试验深入鉴定涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查动力检查液体培养噬菌体裂解和青霉素敏感性试验产荚膜培养及光镜检查串珠试验生化试验基因检测酶免疫法测外毒素动物毒性测定采取标本时必须遵循的两条原则1、尽可能的在抗生素治疗前采取标本；2、除必要时并在具

8、备条件的实验室内，不得用解剖的方式获取标本，所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。（一）炭疽病原学检查——标本采集和样品处理1、血液标本所有的疑似病例和病畜，都应采取血液标本5-10ml，标本量至少应满足下列检查的需要：涂片进行显微镜检查；接种培养基进行细菌分离培养；分离血清检查抗体；常规血液检查。荧光定量PCR检测2、皮肤溃疡标本在皮肤炭疽病人溃疡边缘用棉拭子擦拭，沾取分泌物。（一）炭疽病原学检查——标本采集和样品处理3、粪便与呕吐物标本表现消化道症状的可疑病人收集粪便或呕吐