《毒理学评价研》PPT课件

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1、转基因食品食用安全检测技术贺晓云食品科学与营养工程学院农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心（北京）2012.9温故而知新2012.9.28食品毒理学评价分为几个阶段？每一个阶段的主要试验？第三阶段亚慢性毒性试验，90天喂养，繁殖试验，代谢试验第四阶段慢性毒性试验，2年喂养，致癌试验第二阶段亚急性毒性与致突变试验：短期喂养Ames试验微核试验精子畸形第一阶段急性毒性试验二、毒理学评价方法在转基因食品安全性评价中应用与案例外源基因表达产物的毒理学检测全食品的毒理学检测毒理学检测方法检测对象：外源基因表达产物全食品

2、检测依据：OECD关于化学物质评价方法(OECD,1995)《食品安全性毒理学评价程序和方法》外源基因表达产物的毒理学检测外源基因表达产物的毒理学检测1氨基酸序列同源性比较2加热和模拟胃肠道消化稳定性3动物急性经口毒性试验氨基酸序列同源性比较通过对基因序列数据库EMBL和蛋白质序列数据库的SWISSPORT的查询中，共发现毒蛋白1458种。序列比对工具BLAST是在蛋白质序列库中搜索氨基酸序列的工具FASTA是常用的核酸和蛋白质序列库搜索程序一般相似性程度极高的E值一般小于1e-7加热和模拟胃肠道消化稳定性试验条

3、件：加热：95℃，5-30min模拟胃肠道：离子、pH、酶活、温度检测方法：蛋白电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫学方法：酶联免疫（ELISA）和蛋白免疫杂交（Westernblot）生物活性检测与比较Caoetal.RegulatoryToxicologyandPharmacology.2010,58(3):474-81.热稳定性模拟消化稳定性急性毒性试验由于蛋白质类毒素对哺乳动物的毒性作用通常为急性模式，因此，对于外源蛋白的毒性检测首先关注其急性毒性。试验目的测定LD50；对受试物进行急性毒性分级，为其他试验剂量设

4、计提供参考试验动物啮齿类：大小鼠非啮齿类：犬、猴急性毒性试验试验方法按照《食品安全性毒理学评价程序与方法—急性毒性试验》（GB15193.3-2003）标准程序进行。设空白对照组，阴性对照组（牛血清白蛋白），外源蛋白组（来源于转基因植物或重组大肠杆菌）。一次性或24h内多次灌胃动物一定剂量的蛋白，观察7~14天，观察中毒表现，统计死亡数，计算半数致死量LD50。急性毒性试验结果分析毒性分为极毒，剧毒，中等毒性，低毒，实际无毒，无毒六种情况。如果蛋白的灌胃量≥5g/kg体重，仍未对动物产生毒性作用，则认为这种蛋白是

5、安全的。也有用人类最大可能暴露量的1000倍或5000倍作为安全系数。急性毒性试验结果判定：LD50剂量小于人的可能摄入量的10倍，则放弃该受试物用于食品LD50大于10倍，可进入下一阶段的毒理学试验。LD5010倍左右，应进行重复试验，或者用另一种方法进行验证案例：新霉素磷酸转移酶II（NPTII）的急性毒性试验试验方法：选用80只CD-1小鼠，分成四组，每组雌雄各10只，分别灌胃0，100，1000，5000mgNPTII蛋白/kg体重。灌胃后，动物自由进食与饮水，每天观察两次动物的死亡与中毒情况。在第1天与

6、第7天称量动物体重，第7天称量动物进食量。第8天与第9天处死动物，进行大体病理学检查。Fuchs,R.L.etal.Bio/Technology,1993,11,1537-1547试验结果：全部小鼠均存活，且未发现与处理有关的临床症状。试验期间，全部小鼠的体重均有所增加，并且处理组与对照组的体重增加与进食量无处理相关的显著性差异。大体病理观察也未发现脏器病变。因此蛋白急性口服的最大耐受剂量确定为＞5000mg／kg体重。Fuchs,R.L.etal.Bio/Technology,1993,11,1537-1547

7、如何计算急性毒性剂量是人类摄入量的多少倍？GlobalEnvironmentMonitoringSystem-FoodContaminationMonitoringandAssessmentProgramme(GEMS/Food)——WHO全食品的毒理学检测全食品的毒理学检测急性毒性试验致畸试验亚慢性毒性试验繁殖试验急性毒性实验案例1：抗除草剂转基因水稻的安全性评价实验前稻米碾成粉，80℃下2h烘熟。用1%羧甲基纤维素溶解。选40只健康成年ICR小鼠，雌雄各半。随机分成两组，每组20只，雌雄各半。分别灌胃30g/

8、kg·bw剂量转基因水稻和阴性对照(1%羧甲基纤维素)。24h内4次灌胃，观察10d后处死小鼠。观察肝、肾、脾、胸腺等脏器的形态特征。试验结果：实验期间，两组小鼠均未见明显中毒症状，也无死亡。观察小鼠的肝、肾、脾、胸腺等脏器均无异常变化,病理检查各脏器均无异常改变。抗除草剂基因(bar)转基因稻米对雌雄小鼠经口LD50均大于20g/kg体重说明属无毒类薛大伟等.农业生物技