《实验三通》PPT课件

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1、一、物理因素对细菌的影响(1.5学时)1.高压蒸汽灭菌法（两个实验室一台）2.紫外线杀菌实验（普通平板：4个）二、肠道致病菌的鉴定(2.5学时)1.双糖铁培养基：8个2.玻片凝集实验：每人一张3.革兰染色：每人一张三、药敏实验(1学时)示教介绍及展示示教平板第三次实验课内容（3个）内容提要三、药敏试验二、肠道致病菌的鉴定一、物理因素对细菌的影响一、物理因素对细菌的影响1.高压蒸汽灭菌法2.紫外线对细菌的影响1.高压蒸汽灭菌法完全杀灭细菌的繁殖体和芽胞压力：103.4KPa温度:121.3℃时间：15-20min（43页）使用方法：①加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，以两两对称的方式同时

2、旋紧相对的两个螺旋，使锅盖均匀密闭。②用电炉加热，同时打开排气阀门，使冷空气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。③继续加热注视压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字即调节热源，维持15～20min．④停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖，取出灭菌物品。全自动高压蒸汽灭菌锅注意事项：锅内物品不宜过紧。注意排出冷气，否则气压表虽已达15磅，温度达不到121.3℃，不能保证灭菌效果。灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引起破裂。不耐高热高压之物品，不能用此法。紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。紫外线中波长265-266nm的杀菌作用最强。杀菌机制：引起

3、DNA链上相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰DNA的复制和转录，导致细菌死亡。2.紫外线对细菌的影响方法:（每个实验室4个培养皿）取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，取一无菌滤纸片将平皿部分遮盖（或打开一半平皿盖），置于紫外灯下照射30分钟，将纸片拿开，然后盖好平皿，37℃倒置培养24h后取出观察结果。滤纸片用后需要用火烧掉密涂接种分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。二、肠道致病菌的鉴定病原菌的检验程序增菌培养革兰染色分离培养接种琼脂斜面纯培养采集标本生化试验血清学试验动物试验分析鉴定革兰染色观察菌落特征一、糖发酵试验[原理

4、]根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。1、确定细菌是否生长。2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”表示。3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“”表示。4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。[结果][方法]取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18-24小时

5、，观察结果。大肠杆菌伤寒杆菌副伤寒杆菌葡萄糖+乳糖--糖发酵实验二、硫化氢产生试验[原理]某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。[方法]分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养基中。37℃孵育24小时后观察结果。[结果]沿穿刺线部位呈黑褐色，表明有硫化氢产生，为阳性以“+”表示。不变色者为阴性，以“-”表示。大肠杆菌：-变形杆菌：+双糖铁培养基乳糖和葡萄糖:产酸或产气。硫酸亚铁:如细菌分解含硫氨基酸生成硫化氢,可形成黑色沉淀。酚红指示剂:酸:黄碱:红双糖铁培养基的用途用于观察细菌对葡萄糖及乳糖

6、的发酵能力（产酸产气）。用于观察细菌是否产生硫化氢。大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验）,斜面及低层均呈黄色并有气泡。沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖,不发酵乳糖,分解葡萄糖产的酸使培养基PH下降,酚红指示剂变黄,但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%,斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸,且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作用,斜面变红,而底层则为黄色。细菌分解含硫氨基酸生成的硫化氢可以和FeSO4反应生成FeS黑色沉淀。双糖铁培养基的特性双糖铁培养基上细菌的生长现象大肠杆菌黄色有气泡伤寒杆菌上红下黄中间有黑色沉淀痢疾杆菌上红下黄Doublesugerironslant1.标本的采集粪便标本SS培养

7、基2.分离培养观察菌落特点革兰染色(形态学鉴定)SS平板接种双糖铁培养基（生化反应）玻片凝集试验（血清学鉴定）肠道杆菌的鉴定程序一、观察上次实验内容在SS平板上可看到散在分布的大小不同、颜色不同的菌落。一种是较大的红色菌落。一种是较小的无色半透明的菌落，中间有黑色沉淀。方法：穿刺+斜面接种针挑取单个菌落，沿培养基中心垂直插入至距离管底0.5cm处，原路退出。接种环挑取单个菌落，自斜面底部向上划一直